Aktivering och konjugation av lösliga polysackarider med 1-Cyano-4-Dimethylaminopyridine Tetrafluoroborate (CDAP)

Published: June 14th, 2021

DOI:

10.3791/62597

Andrew Lees¹, James Zhou¹

¹Fina Biosolutions LLC

ERRATUM NOTICE

Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …

Konjugatvacciner är anmärkningsvärda framsteg inom vaccinologi. För beredning av polysackaridkonjugatvacciner kan polysackariderna bekvämt funktionaliseras och kopplas till vaccinbärarproteiner med 1-cyano-4-dimethylaminopyridintefluoreborat (CDAP), ett lätt hantera cyanylerande reagens. CDAP aktiverar polysackarider genom att reagera med kolhydrathydroxidgrupper vid pH 7-9. Cdap:s stabilitet och reaktivitet är mycket pH-beroende. Reaktionens pH minskar också under aktiveringen på grund av hydrolysen av CDAP, vilket gör bra pH-kontroll nyckeln till reproducerbar aktivering. Det ursprungliga CDAP-aktiveringsprotokollet utfördes vid rumstemperatur i obyggda pH 9-lösningar.

På grund av den snabba reaktionen under detta tillstånd (<3 min) och den medföljande snabba pH-droppen från den snabba CDAP-hydrolysen var det utmanande att snabbt justera och bibehålla målreaktions-pH under den korta tidsramen. Det förbättrade protokollet som beskrivs här utförs vid 0 °C, vilket saktar cdap hydrolys och förlänger aktiveringstiden från 3 min till ~15 min. Dimetyllaminopyridin (DMAP) användes också som buffert för att förjustera polysackaridlösningen till målaktiverings-pH innan CDAP-reagenset tillskom. Den längre reaktionstiden, i kombination med den långsammare CDAP-hydrolysen och användningen av DMAP-buffert, gör det lättare att upprätthålla aktiverings-PH under hela aktiveringsprocessen. Det förbättrade protokollet gör aktiveringsprocessen mindre frenetisk, mer reproducerbar och mer mottaglig för skalning.

Erratum

Erratum: Activation and Conjugation of Soluble Polysaccharides using 1-Cyano-4-Dimethylaminopyridine Tetrafluoroborate (CDAP)

An erratum was issued for: Activation and Conjugation of Soluble Polysaccharides using 1-Cyano-4-Dimethylaminopyridine Tetrafluoroborate (CDAP). A figure was updated.

Figure 4 was updated from:

Figure 4: Representative results for CDAP activation of dextran. Typical standard curves for the (A) resorcinol/sulfuric acid and (B) TNBS assays. The assay results for dextran activated with 0.25 and 0.5 mg CDAP/mg dextran are shown. Glucose was used as the standard for the resorcinol assay. Dextran, in mg/mL, is divided by 100 kDa to give a molar concentration. The hydrazide concentration is determined using ADH as the standard and the results expressed as µM Hz. (C) Calculation of hydrazide: dextran ratios.The level of derivatization was calculated as hydrazides per 100 kDa of dextran to facilitate the comparison between polymers of different average molecular weights. The % weight ratio of g ADH/g dextran was calculated using a MW of 174 g/mole for ADH. Please click here to view a larger version of this figure.

to: