Abstract
Immunology and Infection
1-Cyano-4-Dimetilamiopyridine Tetrafluoroborate (CDAP) kullanılarak Çözünür Polisakkaritlerin Aktivasyonu ve Konjugasyonu
ERRATUM NOTICE
Important: There has been an erratum issued for this article. Read more …Konjuge aşılar aşılarda vaksinolojide dikkate değer gelişmeler vardır. Polisakkarit konjuge aşıların hazırlanması için, polisakkaritler rahatça işlevsel hale getirilebilir ve kullanımı kolay bir siyantüre reaktif olan 1-siyano-4-dimetilamopyridine tetrafluoroborate (CDAP) kullanılarak aşı taşıyıcı proteinlere bağlanabilir. CDAP, pH 7-9'da karbonhidrat hidroksil grupları ile reaksiyona geçerek polisakkaritleri aktive eder. CDAP'nin stabilitesi ve reaktivitesi yüksek oranda pH'a bağlıdır. Reaksiyonun pH'ı, CDAP'nin hidrolizi nedeniyle aktivasyon sırasında da azalır, bu da iyi pH kontrolünü tekrarlanabilir aktivasyonun anahtarı haline getirir. Orijinal CDAP aktivasyon protokolü, oda sıcaklığında unbuffered pH 9 çözeltilerinde gerçekleştirildi.
Bu durumdaki hızlı reaksiyon (<3 dk) ve hızlı CDAP hidrolizinden gelen hızlı pH düşüşü nedeniyle, hedef reaksiyon pH'ını kısa zaman diliminde hızlı bir şekilde ayarlamak ve korumak zordu. Burada açıklanan geliştirilmiş protokol, CDAP hidrolizini yavaşlatan ve aktivasyon süresini 3 dakikadan ~15 dakikaya uzatan 0 °C'de gerçekleştirilir. Dimetilamitropyridin (DMAP), CDAP reaktifini eklemeden önce polisakkarit çözeltisini hedef aktivasyon pH'ına önceden ayarlamak için tampon olarak da kullanılmıştır. Daha uzun reaksiyon süresi, daha yavaş CDAP hidrolizi ve DMAP tamponunun kullanımı ile birleştiğinde, aktivasyon pH'ının aktivasyon işleminin tüm süresi boyunca korunmasını kolaylaştırır. Geliştirilmiş protokol, etkinleştirme işlemini daha az çılgın, daha tekrarlanabilir ve ölçeklendirmeye daha uygun hale getirir.
Erratum
Erratum: Activation and Conjugation of Soluble Polysaccharides using 1-Cyano-4-Dimethylaminopyridine Tetrafluoroborate (CDAP)An erratum was issued for: Activation and Conjugation of Soluble Polysaccharides using 1-Cyano-4-Dimethylaminopyridine Tetrafluoroborate (CDAP). A figure was updated.
Figure 4 was updated from:
Figure 4: Representative results for CDAP activation of dextran. Typical standard curves for the (A) resorcinol/sulfuric acid and (B) TNBS assays. The assay results for dextran activated with 0.25 and 0.5 mg CDAP/mg dextran are shown. Glucose was used as the standard for the resorcinol assay. Dextran, in mg/mL, is divided by 100 kDa to give a molar concentration. The hydrazide concentration is determined using ADH as the standard and the results expressed as µM Hz. (C) Calculation of hydrazide: dextran ratios.The level of derivatization was calculated as hydrazides per 100 kDa of dextran to facilitate the comparison between polymers of different average molecular weights. The % weight ratio of g ADH/g dextran was calculated using a MW of 174 g/mole for ADH. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 4: Representative results for CDAP activation of dextran. Typical standard curves for the (A) resorcinol/sulfuric acid and (B) TNBS assays. The assay results for dextran activated with 0.25 and 0.5 mg CDAP/mg dextran are shown. Glucose was used as the standard for the resorcinol assay. Dextran, in mg/mL, is divided by 100 kDa to give a molar concentration. The hydrazide concentration is determined using ADH as the standard and the results expressed as µM Hz. (C) Calculation of hydrazide: dextran ratios.The level of derivatization was calculated as hydrazides per 100 kDa of dextran to facilitate the comparison between polymers of different average molecular weights. The % weight ratio of g ADH/g dextran was calculated using a MW of 174 g/mole for ADH. Please click here to view a larger version of this figure.
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved