ड्रोसोफिला ओसाइट में परमाणु प्रवासन

ड्रोसोफिलामें, ओसाइट न्यूक्लियस ऊजनजेलिस के दौरान माइक्रोट्यूबुल पर निर्भर प्रवास से गुजरता है। यहां, हम एक प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं जिसे अंडे के कक्षों पूर्व वीवोपर लाइव इमेजिंग करके माइग्रेशन का पालन करने के लिए विकसित किया गया था। हमारी प्रक्रिया कताई-डिस्क कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके बहु-स्थिति 3डी समय-चूक फिल्मों को प्राप्त करने के लिए 12 एच के लिए जीवित अंडे कक्षों का रखरखाव करती है।

लाइव सेल इमेजिंग विशेष रूप से सेलुलर और आणविक तंत्र को समझने के लिए आवश्यक है जो ऑर्गेनेल आंदोलनों, साइटोस्केलेटन पुनर्व्यवस्थाओं, या कोशिकाओं के भीतर ध्रुवता पैटर्निंग को विनियमित करता है। ओसाइट न्यूक्लियस पोजिशनिंग का अध्ययन करते समय, इस प्रक्रिया की गतिशील घटनाओं को पकड़ने के लिए लाइव-इमेजिंग तकनीकें आवश्यक हैं। ड्रोसोफिला अंडा कक्ष एक बहुकोशिकीय संरचना है और इस घटना का अध्ययन करने के लिए एक उत्कृष्ट मॉडल प्रणाली है क्योंकि इसके बड़े आकार और कई आनुवंशिक उपकरणों की उपलब्धता है। ड्रोसोफिला मिड-ऊजीनेसिस के दौरान, नाभिक माइक्रोट्यूबुले-जनित बलों द्वारा मध्यस्थता की गई असममित स्थिति को अपनाने के लिए ओसाइट के भीतर एक केंद्रीय स्थिति से स्थानांतरित हो जाता है। भ्रूण और बाद में वयस्क मक्खी की ध्रुवता कुल्हाड़ियों को निर्धारित करने के लिए नाभिक का यह प्रवास और स्थिति आवश्यक है। इस माइग्रेशन की एक विशेषता यह है कि यह तीन आयामों (3 डी) में होता है, जिससे लाइव इमेजिंग की आवश्यकता होती है। इस प्रकार, परमाणु प्रवास को विनियमित करने वाले तंत्रों का अध्ययन करने के लिए, हमने विच्छेदित अंडे कक्षों को संस्कृति देने और कताई-डिस्क कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके समय-चूक अधिग्रहण द्वारा 12 घंटे के लिए लाइव इमेजिंग करने के लिए एक प्रोटोकॉल विकसित किया है । कुल मिलाकर, हमारी स्थितियां हमें लंबे समय तक ड्रोसोफिला अंडे के कक्षों को जीवित रखने की अनुमति देती हैं, जिससे परमाणु प्रवास को पूरा करने को 3 डी में बड़ी संख्या में नमूनों में कल्पना करने में सक्षम बनाया जा सके ।

कई वर्षों से ड्रोसोफिला ओसाइट परमाणु प्रवास का अध्ययन करने के लिए एक आदर्श प्रणाली के रूप में उभरा है । ड्रोसोफिला ओसाइट एक बहुकोशिकीय संरचना में विकसित होता है जिसे अंडा कक्ष कहा जाता है। अंडे के कक्षों में 16 रोगाणु कोशिकाएं (15 नर्स कोशिकाएं और ओसाइट) शामिल हैं जो कूप दैहिक कोशिकाओं की एक महामारी परत से घिरा हुआ है। अंडा कक्ष विकास को 14 चरणों(चित्रा 1A)में विभाजित किया गया है, जिसके दौरान ओसाइट बढ़ेगा और भ्रूण के प्रारंभिक विकास के लिए आवश्यक भंडार जमा होगा। विकास के दौरान, माइक्रोट्यूबुल पुनर्गठन और मातृ निर्धारकों के असममित परिवहन पर, ऑसाइट एंटेरो-पृष्ठीय और डोरसो-वेंट्रल कुल्हाड़ियों के साथ ध्रुवित होता है। ये अक्....

1. इमेजिंग मध्यम तैयारी

1. उपयोग के दिन ताजा मीडिया तैयार करें। श्नाइडर माध्यम के पिपेट 200 माइक्रोन (एल-ग्लूटामाइन और 0.40 ग्राम/एल ऑफ नाएचसीओ₃ 10% गर्मी-निष्क्रिय भ्रूण बछड़े सीरम, पेनिसिलिन के 100 यू/एमए?.......

माइग्रेशन से पहले, नाभिक गतिशील होता है और पूर्व-प्रवास के रूप में परिभाषित अवधि के दौरान केंद्रीय स्थिति के चारों ओर दोलन करता है। ये छोटे आंदोलन उन ताकतों को आगे बढ़ाने और खींचने का संतुलन दर्शाते है?.......

अन्य प्रोटोकॉल ों में वर्णन किया गया है कि ड्रोसोफिला अंडे के कक्षों को लाइव-इमेजिंग परख^{12, 13}के लिए तैयार और संस्कृति कैसे तैयार किया^जाए। इस प्रोटोकॉल की नवीनता एक खोखले एल्यू?.......

हम जीन-एंटोनी लेपसेंट और निकोलस टिसोट के बेहद आभारी हैं जिन्होंने मूल रूप से प्रोटोकॉल विकसित किया और हमारे साथ चित्र 3 के कुछ चित्रमय तत्वों को साझा किया। हम फैनी रोलैंड-गॉसेलिन का शुक्रिया अदा करते हैं जिन्होंने फिगर 4 की तस्वीरें लीं । हम अन्य प्रयोगशाला सदस्यों को भी सहायक चर्चाओं के लिए धन्यवाद देते हैं जिन्होंने इस तकनीक के सुधार में योगदान दिया और नथानिएल हेनेमैन ने अपनी टिप्पणियों के लिए इस पांडुलिपि को बेहतर बनाने में मदद की। हम इंस्टीट्यूट जैक्स मोनोड की इमागोसैन कोर सुविधा को स्वीकार करते हैं, फ्रांस-बायोइमेजिंग (एएनआर-10-आईएनबीएस-04) के सदस्य। Maëlys Loh फ्रांस के अनुसंधान मंत्रालय (MESRI) से पीएचडी फैलोशिप द्वारा समर्थित है । एंटोनी गुइशे और फ्रेड बर्नार्....