用组织培养幼苗制备和饲养轴性昆虫用于叶甲虫的宿主 - 肠道微生物群相互作用研究

为了获得轴性昆虫，其卵表面被灭菌，然后使用轴性叶子饲养孵化的幼虫。这种方法为抗焦虑昆虫的制备提供了一种有效的方法，而无需施用抗生素或开发人造饮食，这也可以应用于其他食叶昆虫。

昆虫的肠道被各种细菌定植，这些细菌可以深刻地影响宿主的生理特征。将特定的细菌菌株引入轴性昆虫中是验证肠道微生物功能并阐明肠道微生物 - 宿主相互作用机制的强大方法。给予抗生素或对卵子表面进行消毒是两种常用的方法，用于清除昆虫的肠道细菌。然而，除了抗生素对昆虫的潜在不利影响外，以前的研究表明，喂食抗生素并不能消除肠道细菌。因此，无菌人工饲料通常用于维持轴性昆虫，这是一个繁琐且劳动密集型的过程，不能完全类似于天然食品中的营养成分。这里描述的是一种有效且简单的方案，用于制备和维持叶甲虫（Plagiodera versicolora）的轴性幼虫。具体来说，甲虫卵的表面被消毒，然后使用无菌的杨树叶来饲养轴系幼虫。通过培养依赖性和培养无关性测定进一步证实了昆虫的轴性状态。通过结合鸡蛋消毒和无菌栽培，共同开发了一种有效且方便的方法来获得轴性 花叶假单胞菌，为其他食叶昆虫提供了易于转移的工具。

与哺乳动物类似，昆虫消化道是食物消化和吸收的空腔。大多数昆虫含有多种共生细菌，这些细菌在肠道中茁壮成长，并以宿主¹提供的营养为生。肠道共生群落对昆虫的多种生理过程具有深远的影响，包括食物消化和解毒^2，3，4，营养和发育^5，6，7，对病原体和寄生虫的防御^{8，9，10，11}，化学通讯^12，13 和行为^14，15.有趣的是，一些肠道微生物群可能兼性致病性或被入侵病原体操纵以加重感染，这表明肠道细菌在某些情况下可能是有害的

1. 昆虫饲养

1. 在生长室中维持花 斑芽孢杆菌 种群，条件为27°C和70±5%相对湿度，光周期为16小时光照/ 8小时黑暗。将它们放在带有瓷砖湿吸纸的穿孔塑料盒中，并喂它们新鲜的杨树枝。在吸收纸上喷洒清水以保持水分，并每两天更换一次树枝。
2. 分离成虫在化蛹后产卵。给它们喂食嫩叶以获得更多的卵。
3. 收集新产卵（24小时内）。将卵放在潮湿的吸收纸上60?.......

P. versicolora的寿命阶段如图1所示。成年男性比成年女性小（图1A）。在田野里，甲虫将其卵聚集在叶子上;在这里，四个卵从叶子上分离出来（图1B）。用于斧头昆虫饲养的杨树茎段和幼苗如图2所示。3^龄幼虫的肠道如图3所示，肠道段用白色括号标记。

制备无菌幼虫和通过重新引入特定细菌菌株获得无菌幼虫是阐明宿主 - 微生物相互作用机制的有力方法。新孵化的幼虫以两种主要方式获得肠道微生物群：从母亲到后代的垂直传播或从兄弟姐妹和环境^{的水平获取34}。前者可以通过亲本通过污染卵表面³⁵将后代转移给后代来实现。因此，通过对昆虫卵表面^{27、28、29.......}

这项工作由中国国家自然科学基金（31971663）和CAST青年精英科学家赞助计划（2020QNRC001）资助。