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Biology

Zebrafish कॉर्नियल घाव हीलिंग: घर्षण से घाव बंद इमेजिंग विश्लेषण करने के लिए

Published: March 1st, 2022

DOI:

10.3791/63605

1Institute of Biotechnology, HiLIFE, University of Helsinki, 2Institute for Neurosciences of Montpellier, Univ Montpellier

यह प्रोटोकॉल सेलुलर स्तर पर बाद के घाव के बंद होने का आकलन करने के लिए घर्षण के माध्यम से ज़ेब्राफ़िश की ओकुलर सतह को नुकसान पहुंचाने पर केंद्रित है। यह दृष्टिकोण आंशिक रूप से कॉर्नियल एपिथेलियम को हटाने के लिए एक ओकुलर का शोषण करता है और घाव बंद होने के दौरान सेल आकृति विज्ञान में परिवर्तन को ट्रैक करने के लिए स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करता है।

आंख की पारदर्शी सतह के रूप में, कॉर्निया स्पष्ट दृष्टि के लिए महत्वपूर्ण है। अपने स्थान के कारण, यह ऊतक पर्यावरणीय अपमान के लिए प्रवण है। दरअसल, आंखों की चोटों को सबसे अधिक बार नैदानिक रूप से सामना करना पड़ता है, वे कॉर्निया के लिए हैं। जबकि कॉर्नियल घाव भरने का बड़े पैमाने पर छोटे स्तनधारियों (यानी, चूहों, चूहों और खरगोशों) में अध्ययन किया गया है, कॉर्नियल फिजियोलॉजी अध्ययनों ने ज़ेबराफ़िश सहित अन्य प्रजातियों की उपेक्षा की है, ज़ेबराफ़िश एक क्लासिक शोध मॉडल होने के बावजूद।

यह रिपोर्ट ज़ेब्राफ़िश पर कॉर्नियल घर्षण करने की एक विधि का वर्णन करती है। घाव एक ओकुलर burr का उपयोग कर anesthetized मछली पर विवो में प्रदर्शन किया जाता है। यह विधि एक पुनरुत्पादक उपकला घाव के लिए अनुमति देती है, जिससे आंख के बाकी हिस्सों को बरकरार रखा जाता है। घर्षण के बाद, घाव बंद करने की निगरानी 3 घंटे के दौरान की जाती है, जिसके बाद घाव को फिर से मापा जाता है। स्कैनिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके, छवि प्रसंस्करण के बाद, उपकला सेल आकार, और एपिकल प्रोट्रूशियंस की जांच कॉर्नियल उपकला घाव बंद होने के दौरान विभिन्न चरणों का अध्ययन करने के लिए की जा सकती है।

ज़ेब्राफ़िश मॉडल की विशेषताएं उपकला ऊतक शरीर विज्ञान के अध्ययन और उपकला कोशिकाओं के सामूहिक व्यवहार की अनुमति देती हैं जब ऊतक को चुनौती दी जाती है। इसके अलावा, आंसू फिल्म के प्रभाव से वंचित एक मॉडल का उपयोग तनाव के लिए कॉर्नियल प्रतिक्रिया के बारे में नए जवाब पैदा कर सकता है। अंत में, यह मॉडल किसी भी उपकला ऊतक में शामिल सेलुलर और आणविक घटनाओं के चित्रण की भी अनुमति देता है जो एक भौतिक घाव के अधीन है। इस विधि को प्रीक्लिनिकल परीक्षण में दवा की प्रभावशीलता के मूल्यांकन के लिए लागू किया जा सकता है।

जैसा कि अधिकांश एपिथेलिया बाहरी वातावरण के संपर्क में हैं, वे शारीरिक चोट के लिए प्रवण हैं, जिससे उन्हें घाव भरने की प्रक्रियाओं के अध्ययन के लिए अच्छी तरह से अनुकूल बनाया जाता है। अच्छी तरह से अध्ययन किए गए ऊतकों में, कॉर्निया घाव भरने के सेलुलर और आणविक पहलुओं की जांच में एक बेहद उपयोगी मॉडल है। एक पारदर्शी बाहरी सतह के रूप में, यह आंख को शारीरिक सुरक्षा प्रदान करता है और रेटिना पर प्रकाश को केंद्रित करने वाला पहला तत्व है। जबकि रेटिना की संरचना और कोशिका संरचना प्रजातियों1 के बीच भिन्न होती है, कॉर्निया के ये तत्व आमतौर पर प्रजातियों की परवाह किए बिना सभी कैमरा-प्रकार की आंखों में समान होते हैं।

कॉर्निया तीन मुख्य....

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सभी प्रयोगों को राष्ट्रीय पशु प्रयोग बोर्ड द्वारा अनुमोदित किया गया था।

1. तैयारी

  1. पहले से संज्ञाहरण26 के लिए उपयोग किए जाने वाले ट्राइकेन स्टॉक समाधान तैयार करें (इस प्रोट?.......

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यह अध्ययन ज़ेबराफ़िश कॉर्नियल घाव भरने के प्रयोगों में एक नेत्र बुर का उपयोग करके एक विधि का वर्णन करता है। इस विधि को चूहों पर पिछले अध्ययनों से संशोधित किया गया है, जहां को उपकला कोशिका परतों को कुशलत.......

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कॉर्नियल शारीरिक चोटें अस्पताल में नेत्र विज्ञान रोगी के दौरे का सबसे आम कारण हैं। इसलिए, कॉर्नियल पैथोफिजियोलॉजी के विभिन्न पहलुओं के अध्ययन के लिए प्रासंगिक मॉडल स्थापित करना महत्वपूर्ण है। अब तक,.......

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लेखकों ने ज़ेबराफ़िश इकाई तक पहुंच के लिए Pertti Panula और मार्गदर्शन और ज़ेब्राफ़िश प्रयोगों के साथ मदद के लिए हेनरी कोइवुला को धन्यवाद दिया। इस शोध को फिनलैंड की अकादमी, जेन और एटोस एर्को फाउंडेशन, फिनिश सांस्कृतिक फाउंडेशन और एटीआईपी-एवेनिर कार्यक्रम द्वारा समर्थित किया गया था। इमेजिंग इलेक्ट्रॉन माइक्रोस्कोपी इकाई और लाइट माइक्रोस्कोपी यूनिट, जैव प्रौद्योगिकी संस्थान में किया गया था, जो HiLIFE और Biocenter Finland द्वारा समर्थित था।

....

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NameCompanyCatalog NumberComments
0.1M Na-PO4 (sodium phosphate buffer), pH 7.4in-houseSolution is prepared from 1M sodium phosphate buffer (1M Na2HPO4 adjusted to pH 7.4 with 1M NaH2PO4).
0.2M Na-PO4 (sodium phosphate buffer), pH 7.4in-houseSolution is prepared from 1M sodium phosphate buffer (1M Na2HPO4 adjusted to pH 7.4 with 1M NaH2PO4).
0.5mm burr tipsAlger Equipment CompanyBU-5S
1M Tris, pH 8.8in-house
adhesive tabsAgar ScientificG3347N
Algerbrush burr, Complete instrumentAlger Equipment CompanyBR2-5
Cotton swapsHeinz Herenz Hamburg1030128
Dissecting platein-house
Dissecting toolsFine Science Tools
double-distilled waterin-house
Eppedorf tubes, 2mlany provider
Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate saltSigmaA5040Caution: causes irritation.
Glutaraldehyde, 50% aqueous solution, grade ISigmaG7651Caution: toxic.
Lidocaine hydrochlorideSigmaL5647Caution: toxic.
mountsAgar ScientificG301P
Petri dishThermo Scientific101VR20
pH indicator stripsMacherey-Nagel92110
Plastic spoonsany provider
Plastic tubes, 15 mlGreiner Bio-One188271
Plastic tubes, 50 mlGreiner Bio-One227261
Scanning electron microscopeFEIQuanta 250 FEG
Soft spongeany provider
Sputter coaterQuorum TechnologiesGQ150TS
StereomicroscopeLeica

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