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Immunology and Infection

眼表面炎症の誘導と関与組織の収集

Published: August 4th, 2022

DOI:

10.3791/63890

1Department of Internal Medicine 3-Rheumatology and Immunology, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen, 2Deutsches Zentrum für Immuntherapie, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen

眼表面の炎症は眼の表面組織に害を及ぼし、眼の重要な機能を損ないます。本プロトコルは、マイボーム腺機能不全(MGD)のマウスモデルにおいて眼の炎症を誘発し、損なわれた組織を収集する方法を記載する。

眼表面疾患には、角膜、結膜、および関連する眼表面腺ネットワークの機能と構造を乱すさまざまな障害が含まれます。マイボーム腺(MG)は、涙液膜の水性部分の蒸発を防ぐ被覆層を作成する脂質を分泌します。好中球と細胞外DNAトラップは、アレルギー性眼疾患のマウスモデルでMGと眼の表面に生息しています。凝集好中球細胞外トラップ(aggNET)は、MG出口を閉塞し、MG機能障害を条件付ける細胞外クロマチンで構成されるメッシュ状のマトリックスを定式化します。ここでは、眼表面炎症およびMG機能障害を誘発する方法が提示される。角膜、結膜、まぶたなど、眼の表面に関連する臓器を採取する手順が詳細に説明されています。各臓器を処理するための確立された技術を使用して、MG機能障害の主要な形態学的および組織病理学的特徴も示されます。眼の滲出液は、眼の表面の炎症状態を評価する機会を提供します。これらの手順により、前臨床レベルでの局所および全身の抗炎症介入の調査が可能になります。

瞬きするたびに、角膜上に分散した滑らかな涙液膜が補充されます。眼表面上皮は、眼表面上の涙液膜の分布および正しい配向を促進する。ムチンは角膜と結膜の上皮細胞によって提供され、涙腺から来る涙液膜の水性部分を目の表面に配置するのに役立ちます。最後に、MGは、涙液膜1、2、3の水性部分の蒸発を防ぐ被覆層を作成する脂質を分泌する。このように、すべての眼器官の協調機能は、侵入する病原体や怪我から眼の表面を保護し、痛みや不快感なしに透き通った視力をサポートします。

健康な眼の表面では、眼を流れる分泌物または眼のリウマチがほこり、死んだ上皮細胞、細菌、粘液、および免疫細胞を一掃します。凝集好中球細胞外トラップ(aggNET)は、細胞外クロマチンで構成されるメッシュ状のマトリックスを定式化し、これらの成分を眼のリウマチに取り込みます。AggNETは、炎症誘発性サイトカインおよびケモカインのタンパク質分解によって炎症を解消します4。しかし、それらが機能不全になると、これらの異常なアグネットは、COVID-195、胆石6、および唾液分泌症

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動物を含むすべての手順は、動物福祉に関する制度的ガイドラインに従って実施され、フリードリヒアレクサンダー大学エアランゲンニュルンベルク(FAU)の動物福祉委員会によって承認されました(許可番号:55.2.2-2532-2-1217)。本研究では、7〜9週齢の雌C57Bl / 6マウスを使用しました。マウスは市販の供給源( 材料表を参照)から入手し、12時間の昼/夜サイクルで特定の病原体のない状?.......

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本プロトコルは、眼表面炎症のマウスモデルを確立するための逐次ステップを記載する。プロトコルは、治療法を局所的に適用し、眼の滲出液を取得し、健康なまぶたや炎症を起こしたまぶた(図2)、角膜、結膜などの関連する付属器官を切除する方法を示すことを目的としています。結膜の単離のために上まぶたを解剖するときは注意を払い、角膜の解剖中に1x PBSに保?.......

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マイボーム腺の油性分泌は、健康な目にとって非常に重要です22。しかしながら、両眼瞼の足根板上に位置する平行鎖として並ぶ凝集好中球細胞外トラップ(aggNET)によるこれらの皮脂腺の閉塞は、涙液膜23を破壊する可能性がある。この破壊は、マイボーム腺機能障害(MGD)1 と涙液の蒸発の加速をもたらし、眼の表面2の損?.......

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この作業は、ドイツ研究財団(DFG)2886 PANDORAプロジェクト-No.B3によって部分的にサポートされました。SCHA 2040/1-1;MU 4240/2-1;CRC1181(C03);TRR241(B04)、H2020-FETOPEN-2018-2020プロジェクト861878、およびフォルクスワーゲン財団(助成金97744)からMHへ。

....

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NameCompanyCatalog NumberComments
1x PBSGibco
Aluminium HydroxideImject alum Adjuvant7716140 mg/ mL
Final Concentration: in vivo: 1 mg/ 100 µL
C57Bl/6 mice, aged 7–9 weeksCharles River Laboratories 
CalciumCarl rothCN93.11 M
Final Concentration: 5 mM
Curved forcepsFST by Dumont SWITZERLAND5/45 11251-35
Fine sharp scissorFST Stainless steel, Germany15001-08
Laminar safety cabinetHerasafe
Macrophotography CameraCanonEOS6D
Macrophotography Camera (without IR filter)NikonD5300
MnaseNew England biolabsM0247S2 x 106 gel U/mL
Multi-analyte flow assay kit (Custom mouse 13-plex panel)BiolegendCLPX-200421AM-UERLAN
NaCl 0,9% (Saline)B.Braun
Ovalbumin (OVA)Endofit, Invivogen9006-59-110 mg/200 µL in saline
Pertussis toxin ThermoFisher Scientific PHZ117450 µg/ 500 µL in saline
Final Concentration: in vivo: 100 µg/ 100 µL
PetridishGreiner bio-one628160
ScalpelFeather disposable scalpelNo. 21 Final Concentration: in vivo:  300 ng/ 100 µL
StereomicroscopeZaissStemi508
Syringe (corneal/iris washing)BD Microlane27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm
Syringe (i.p immunization)BD Microlane24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm

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