Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Immunology and Infection
Okulær overflatebetennelse skader det okulære overflatevevet og kompromitterer vitale funksjoner i øyet. Den nåværende protokollen beskriver en metode for å indusere okulær betennelse og samle kompromittert vev i en musemodell av Meibomian kjertel dysfunksjon (MGD).
Okulære overflatesykdommer inkluderer en rekke lidelser som forstyrrer funksjonene og strukturene i hornhinnen, bindehinden og det tilhørende okulære overflatekjertelnettverket. Meibomske kjertler (MG) utskiller lipider som skaper et dekklag som forhindrer fordampning av den vandige delen av tårefilmen. Neutrofiler og ekstracellulære DNA-feller befolker MG og den okulære overflaten i en musemodell av allergisk øyesykdom. Aggregerte nøytrofile ekstracellulære feller (aggNETs) formulerer en maskelignende matrise sammensatt av ekstracellulær kromatin som okkluderer MG-uttak og betingelser MG dysfunksjon. Her presenteres en metode for å indusere okulær overflatebetennelse og MG-dysfunksjon. Prosedyrene for å samle organer relatert til okulær overflate, som hornhinnen, bindehinden og øyelokkene, er beskrevet i detalj. Ved hjelp av etablerte teknikker for behandling av hvert organ, vises også de viktigste morfologiske og histopatologiske egenskapene til MG-dysfunksjon. Okulære ekssudater gir mulighet til å vurdere den inflammatoriske tilstanden til den okulære overflaten. Disse prosedyrene muliggjør undersøkelse av aktuelle og systemiske antiinflammatoriske inngrep på preklinisk nivå.
Hvert øyeblikk fyller på den glatte tårefilmen spredt over hornhinnen. Det okulære overflateepitelet letter fordelingen og korrekt orientering av tårfilmen på okulæroverflaten. Muciner er tilveiebrakt av hornhinnen og konjunktivepitelceller for å hjelpe til med å plassere den vandige delen av tårefilmen som kommer fra lacrimalkjertlene på øynenees overflate. Til slutt utskiller MG lipider som skaper et dekklag som forhindrer fordampning av den vandige delen av tårefilmen 1,2,3. På denne måten beskytter de koordinerte funksjonene til alle okulære organer den okulære overflaten....
Alle prosedyrer som involverer dyr ble utført i henhold til de institusjonelle retningslinjene for dyrevelferd og godkjent av dyrevelferdskommisjonen ved Friedrich-Alexander-Universitetet i Erlangen-Nürnberg (FAU) (tillatelsesnummer: 55.2.2-2532-2-1217). Kvinnelige C57Bl/6-mus i alderen 7-9 uker ble brukt i denne studien. Musene ble hentet fra kommersielle kilder (se materialtabell) og holdt i spesifikke patogenfrie forhold med 12 timers dag / natt sykluser.
1. Induksj.......
Denne protokollen beskriver de sekvensielle trinnene for å etablere en murine modell av okulær overflatebetennelse. Protokollene tar sikte på å vise hvordan man bruker terapi lokalt, oppnår okulære ekssudater og avgiftsassosierte tilbehørsorganer som sunne og betente øyelokk (figur 2), hornhinnen og bindehinden. Oppmerksomhet må betales når de øvre øyelokkene blir dissekert for isolering av bindehinden, og den må lagres i 1x PBS under disseksjonen av hornhinnen. Dette vil forhin.......
Den oljeaktige sekresjonen av Meibomian kjertlene er av stor betydning for et sunt øye22. Imidlertid kan obstruksjonen av disse talgkjertlene av aggregerte nøytrofile ekstracellulære feller (aggNETs) som stiller opp som parallelle tråder plassert på tarsalplatene i begge øyelokkene, forstyrre tårefilmen23. Denne forstyrrelsen resulterer i meibomisk kjerteldysfunksjon (MGD)1 og akselerert tårefordampning og betinger skaden på den okulære ove.......
Dette arbeidet ble delvis støttet av German Research Foundation (DFG) 2886 PANDORA Project-No.B3; SCHA 2040/1-1; MU 4240/2-1; CRC1181(C03); TRR241(B04), H2020-FETOPEN-2018-2020 Project 861878, og av Volkswagen-Stiftung (Grant 97744) til MH.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1x PBS | Gibco | ||
Aluminium Hydroxide | Imject alum Adjuvant | 77161 | 40 mg/ mL Final Concentration: in vivo: 1 mg/ 100 µL |
C57Bl/6 mice, aged 7–9 weeks | Charles River Laboratories | ||
Calcium | Carl roth | CN93.1 | 1 M Final Concentration: 5 mM |
Curved forceps | FST by Dumont SWITZERLAND | 5/45 11251-35 | |
Fine sharp scissor | FST Stainless steel, Germany | 15001-08 | |
Laminar safety cabinet | Herasafe | ||
Macrophotography Camera | Canon | EOS6D | |
Macrophotography Camera (without IR filter) | Nikon | D5300 | |
Mnase | New England biolabs | M0247S | 2 x 106 gel U/mL |
Multi-analyte flow assay kit (Custom mouse 13-plex panel) | Biolegend | CLPX-200421AM-UERLAN | |
NaCl 0,9% (Saline) | B.Braun | ||
Ovalbumin (OVA) | Endofit, Invivogen | 9006-59-1 | 10 mg/200 µL in saline |
Pertussis toxin | ThermoFisher Scientific | PHZ1174 | 50 µg/ 500 µL in saline Final Concentration: in vivo: 100 µg/ 100 µL |
Petridish | Greiner bio-one | 628160 | |
Scalpel | Feather disposable scalpel | No. 21 | Final Concentration: in vivo: 300 ng/ 100 µL |
Stereomicroscope | Zaiss | Stemi508 | |
Syringe (corneal/iris washing) | BD Microlane | 27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm | |
Syringe (i.p immunization) | BD Microlane | 24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved