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Immunology and Infection

Inducción de la inflamación de la superficie ocular y recolección de tejidos afectados

Published: August 4th, 2022

DOI:

10.3791/63890

1Department of Internal Medicine 3-Rheumatology and Immunology, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen, 2Deutsches Zentrum für Immuntherapie, Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg and Universitätsklinikum Erlangen

La inflamación de la superficie ocular daña los tejidos de la superficie ocular y compromete las funciones vitales del ojo. El presente protocolo describe un método para inducir inflamación ocular y recolectar tejidos comprometidos en un modelo de ratón de disfunción de la glándula de Meibomio (MGD).

Las enfermedades de la superficie ocular incluyen una variedad de trastornos que alteran las funciones y estructuras de la córnea, la conjuntiva y la red de glándulas de la superficie ocular asociada. Las glándulas de Meibomio (MG) secretan lípidos que crean una capa de cobertura que evita la evaporación de la parte acuosa de la película lagrimal. Neutrófilos y trampas de ADN extracelular pueblan MG y la superficie ocular en un modelo de ratón de enfermedad ocular alérgica. Las trampas extracelulares agregadas de neutrófilos (aggNET) formulan una matriz en forma de malla compuesta de cromatina extracelular que ocluye las salidas de MG y condiciona la disfunción de MG. Aquí, se presenta un método para inducir inflamación de la superficie ocular y disfunción de MG. Los procedimientos para recolectar órganos relacionados con la superficie ocular, como la córnea, la conjuntiva y los párpados, se describen en detalle. Utilizando técnicas establecidas para procesar cada órgano, también se muestran las principales características morfológicas e histopatológicas de la disfunción de MG. Los exudados oculares ofrecen la oportunidad de evaluar el estado inflamatorio de la superficie ocular. Estos procedimientos permiten la investigación de intervenciones antiinflamatorias tópicas y sistémicas a nivel preclínico.

Cada parpadeo de un ojo repone la suave película lagrimal dispersa sobre la córnea. Los epitelios de la superficie ocular facilitan la distribución y correcta orientación de la película lagrimal sobre la superficie ocular. Las mucinas son proporcionadas por la córnea y las células epiteliales de la conjuntiva para ayudar a colocar la parte acuosa de la película lagrimal proveniente de las glándulas lagrimales en la superficie de los ojos. Finalmente, la MG secreta lípidos que crean una capa de recubrimiento que evita la evaporación de la parte acuosa de la película lagrimal 1,2,3....

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Todos los procedimientos con animales se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices institucionales sobre bienestar animal y aprobadas por la comisión de bienestar animal de la Universidad Friedrich-Alexander Erlangen-Nuremberg (FAU) (número de permiso: 55.2.2-2532-2-1217). Para el presente estudio se utilizaron ratones hembra C57Bl/6, de 7 a 9 semanas de edad. Los ratones se obtuvieron de fuentes comerciales (ver Tabla de materiales) y se mantuvieron en condiciones específicas libres de patógeno.......

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El presente protocolo describe los pasos secuenciales para establecer un modelo murino de inflamación de la superficie ocular. Los protocolos tienen como objetivo mostrar cómo aplicar la terapéutica localmente, obtener exudados oculares y extirpar órganos accesorios asociados, como párpados sanos e inflamados (Figura 2), la córnea y la conjuntiva. Se debe prestar atención cuando se diseccionan los párpados superiores para el aislamiento de la conjuntiva, y debe almacenarse en 1x PBS .......

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La secreción oleosa de las glándulas de Meibomio es de gran importancia para un ojo sano22. Sin embargo, la obstrucción de estas glándulas sebáceas por trampas extracelulares agregadas de neutrófilos (aggNETs) que se alinean como hebras paralelas ubicadas en las placas tarsales de ambos párpados puede alterar la película lagrimal23. Esta alteración resulta en disfunción de la glándula de Meibomio (DGM)1 y evaporación lagrimal acelerada y .......

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Este trabajo fue parcialmente apoyado por la Fundación Alemana de Investigación (DFG) 2886 Proyecto PANDORA-No.B3; SCHA 2040/1-1; MU 4240/2-1; CRC1181(C03); TRR241(B04), H2020-FETOPEN-2018-2020 Project 861878, y por la Volkswagen-Stiftung (subvención 97744) a MH.

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NameCompanyCatalog NumberComments
1x PBSGibco
Aluminium HydroxideImject alum Adjuvant7716140 mg/ mL
Final Concentration: in vivo: 1 mg/ 100 µL
C57Bl/6 mice, aged 7–9 weeksCharles River Laboratories 
CalciumCarl rothCN93.11 M
Final Concentration: 5 mM
Curved forcepsFST by Dumont SWITZERLAND5/45 11251-35
Fine sharp scissorFST Stainless steel, Germany15001-08
Laminar safety cabinetHerasafe
Macrophotography CameraCanonEOS6D
Macrophotography Camera (without IR filter)NikonD5300
MnaseNew England biolabsM0247S2 x 106 gel U/mL
Multi-analyte flow assay kit (Custom mouse 13-plex panel)BiolegendCLPX-200421AM-UERLAN
NaCl 0,9% (Saline)B.Braun
Ovalbumin (OVA)Endofit, Invivogen9006-59-110 mg/200 µL in saline
Pertussis toxin ThermoFisher Scientific PHZ117450 µg/ 500 µL in saline
Final Concentration: in vivo: 100 µg/ 100 µL
PetridishGreiner bio-one628160
ScalpelFeather disposable scalpelNo. 21 Final Concentration: in vivo:  300 ng/ 100 µL
StereomicroscopeZaissStemi508
Syringe (corneal/iris washing)BD Microlane27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm
Syringe (i.p immunization)BD Microlane24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm

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