Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Immunology and Infection
Inflammation i ögonytan skadar ögonytans vävnader och äventyrar ögats vitala funktioner. Det nuvarande protokollet beskriver en metod för att inducera okulär inflammation och samla komprometterade vävnader i en musmodell av Meibomian körteldysfunktion (MGD).
Okulära ytsjukdomar inkluderar en rad störningar som stör funktionerna och strukturerna i hornhinnan, konjunktiva och det tillhörande okulära ytkörtelnätverket. Meibomiska körtlar (MG) utsöndrar lipider som skapar ett täckskikt som förhindrar avdunstning av den vattenhaltiga delen av tårfilmen. Neutrofiler och extracellulära DNA-fällor fyller MG och ögonytan i en musmodell av allergisk ögonsjukdom. Aggregerade neutrofila extracellulära fällor (aggNETs) formulerar en nätliknande matris bestående av extracellulärt kromatin som täcker MG-utlopp och villkorar MG-dysfunktion. Här presenteras en metod för att inducera okulär ytinflammation och MG-dysfunktion. Förfarandena för att samla organ relaterade till ögonytan, såsom hornhinnan, konjunktiva och ögonlocken, beskrivs i detalj. Med hjälp av etablerade tekniker för bearbetning av varje organ visas också de viktigaste morfologiska och histopatologiska egenskaperna hos MG-dysfunktion. Okulära exsudater erbjuder möjlighet att bedöma det inflammatoriska tillståndet hos den okulära ytan. Dessa förfaranden möjliggör undersökning av aktuella och systemiska antiinflammatoriska ingrepp på preklinisk nivå.
Varje ögonblick fyller på den släta tårfilmen som sprids över hornhinnan. Det okulära ytepitelet underlättar fördelningen och korrekt orientering av tårfilmen på ögonytan. Muciner tillhandahålls av hornhinnan och konjunktiva epitelceller för att hjälpa till att placera den vattenhaltiga delen av tårfilmen som kommer från lacrimalkörtlarna på ögonens yta. Slutligen utsöndrar MG lipider som skapar ett täckskikt som förhindrar avdunstning av den vattenhaltiga delen av tårfilmen 1,2,3. På detta sätt skyddar de samordnade funktionerna hos alla ögonorgan den okulära ytan från invad....
Alla försök med djur utfördes enligt de institutionella riktlinjerna för djurskydd och godkändes av djurskyddskommissionen vid Friedrich-Alexander-University Erlangen-Nürnberg (FAU) (tillståndsnummer: 55.2.2-2532-2-1217). Kvinnliga C57Bl/6-möss i åldern 7-9 veckor användes för den aktuella studien. Mössen erhölls från kommersiella källor (se materialförteckningen) och förvarades under specifika patogenfria förhållanden med 12 timmars dag/natt-cykler.
1.......
Detta protokoll beskriver de sekventiella stegen för att upprätta en murin modell av okulär ytinflammation. Protokollen syftar till att visa hur man applicerar terapier lokalt, får okulära exsudater och punktskatteassocierade tillbehörsorgan som friska och inflammerade ögonlock (figur 2), hornhinnan och bindhinnan. Uppmärksamhet måste ägnas när de övre ögonlocken dissekeras för isolering av konjunktiva, och det måste förvaras i 1x PBS under dissektion av hornhinnan. Detta fö.......
Den oljiga utsöndringen av de meibomiska körtlarna är av stor betydelse för ett friskt öga22. Obstruktionen av dessa talgkörtlar av aggregerade neutrofila extracellulära fällor (aggNETs) som stämmer upp som parallella strängar som ligger på tarsalplattorna i båda ögonlocken kan emellertid störa tårfilmen23. Denna störning resulterar i Meibomian körtel dysfunktion (MGD)1 och accelererad tåravdunstning och villkorar skadan på ögonyt.......
Detta arbete stöddes delvis av den tyska forskningsstiftelsen (DFG) 2886 PANDORA Project-No.B3; SCA 2040/1-1; MU 4240/2-1; CRC1181(C03); TRR241(B04), H2020-FETOPEN-2018-2020 Project 861878, och av Volkswagen-Stiftung (Grant 97744) till MH.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1x PBS | Gibco | ||
Aluminium Hydroxide | Imject alum Adjuvant | 77161 | 40 mg/ mL Final Concentration: in vivo: 1 mg/ 100 µL |
C57Bl/6 mice, aged 7–9 weeks | Charles River Laboratories | ||
Calcium | Carl roth | CN93.1 | 1 M Final Concentration: 5 mM |
Curved forceps | FST by Dumont SWITZERLAND | 5/45 11251-35 | |
Fine sharp scissor | FST Stainless steel, Germany | 15001-08 | |
Laminar safety cabinet | Herasafe | ||
Macrophotography Camera | Canon | EOS6D | |
Macrophotography Camera (without IR filter) | Nikon | D5300 | |
Mnase | New England biolabs | M0247S | 2 x 106 gel U/mL |
Multi-analyte flow assay kit (Custom mouse 13-plex panel) | Biolegend | CLPX-200421AM-UERLAN | |
NaCl 0,9% (Saline) | B.Braun | ||
Ovalbumin (OVA) | Endofit, Invivogen | 9006-59-1 | 10 mg/200 µL in saline |
Pertussis toxin | ThermoFisher Scientific | PHZ1174 | 50 µg/ 500 µL in saline Final Concentration: in vivo: 100 µg/ 100 µL |
Petridish | Greiner bio-one | 628160 | |
Scalpel | Feather disposable scalpel | No. 21 | Final Concentration: in vivo: 300 ng/ 100 µL |
Stereomicroscope | Zaiss | Stemi508 | |
Syringe (corneal/iris washing) | BD Microlane | 27 G x 3/4 - Nr.20 0,4 x 19 mm | |
Syringe (i.p immunization) | BD Microlane | 24 G1"-Nr 17, 055* 25 mm |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved