איתור וכימות של ננו-צינוריות מנהור באמצעות תמונות תצוגת נפח תלת-ממדית

תגליות אחרונות גילו כי תאים מבצעים העברה בין-תאית ישירה, ארוכת טווח, באמצעות צינורות אקטין-ממברנה בקנה מידה ננומטרי, כלומר "מנהור ננו-צינוריות" (TNTs). TNTs מוגדרים כהרחבות ממברנה דו-שכבתיות פתוחות ומקיפות שומנים, המתווכות המשכיות בין תאים שכנים בקטרים הנעים בין 50 ננומטר ל-1 מיקרומטר. TNTs הודגמו בתחילה בתאי עצב, אך מחקרים עוקבים חשפו את קיומם של TNTs במספר סוגי תאים ומחלות, כגון מחלות נוירודגנרטיביות, זיהומים ויראליים וסרטן. מספר מחקרים התייחסו לננו-מבנים של ממברנות מצומדות חשמלית בין תאים שכנים כאל מבנים דמויי TNT או TNT.

ההבהרה של אולטרה-מבנה במונחים של המשכיות הממברנה בנקודת הקצה היא מאתגרת מבחינה טכנית. בנוסף, מחקרים על תקשורת בין תאים מאתגרים מבחינת אפיון TNTs בשיטות קונבנציונליות בשל היעדר סמנים ספציפיים. TNTs מוגדרים בעיקר כבליטות ממברנה פתוחות מבוססות F-actin. עם זאת, מגבלה מרכזית אחת היא ש-F-אקטין קיים בכל סוגי הבליטות, מה שמקשה על הבחנה בין TNTs לבליטות אחרות. אחד המאפיינים הבולטים של TNTs מבוססי F-actin הוא שמבנים אלה מרחפים בין שני תאים מבלי לגעת בתת-הסטרטום. לכן, ניתן להבחין בנוחות בין TNTs מוכתמים ב-F-actin לבין בליטות אחרות כגון פילופודיה ונויריטים בהתבסס על ריחופין בין תאים.

לאחרונה הראינו כי הפנמה של עמילואיד-β אוליגומרי 1-42 (oAβ) באמצעות אנדוציטוזה תלוית אקטין מעוררת קינאז-1 מופעל p21 (PAK1), אשר מתווך את היווצרותם של TNTs המכילים F-אקטין יחד עם phospho-PAK1 בין תאי עצב_SH-SY5Y. פרוטוקול זה מתווה שיטת ניתוח נפח תלת-ממדית לזיהוי ואפיון TNTs מתמונות z-stack שנלכדו של בליטות ממברנה מוכתמות ב-F-actin ו-phospho-PAK1-immunostained בתאי עצב שטופלו ב-oAβ. יתר על כן, TNTs נבדלים מפיתוח נויריטים וצמיחה עצבית המבוססת על צינורות ממברנה עם F-אקטין ו-β-III טובולין-אימונוסטי.