JoVE Logo
Faculty Resource Center

Sign In

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Representative Results

Discussion

Acknowledgements

Materials

References

Medicine

Synovialvæskeanalyse for at identificere slidgigt

Published: October 20th, 2022

DOI:

10.3791/64351

1Rheumatology Unit, Department of Medicine-DIMED, University of Padova

Synovialvæskeanalyse under transmitteret, polariseret og kompenseret lysmikroskopi bruges til at evaluere den inflammatoriske eller ikke-inflammatoriske karakter af en prøve gennem enkle trin. Det er især nyttigt i slidgigt at detektere calciumkrystaller og identificere en mere alvorlig delmængde af slidgigt.

Synovialvæske (SF) analyse er vigtig ved diagnosticering af slidgigt (OA). Makroskopiske og mikroskopiske træk, herunder total og differentiel antal hvide blodlegemer (WBC), hjælper med at definere den ikke-inflammatoriske karakter af SF, som er et kendetegn ved OA. Hos patienter med OA overstiger WBC i SF-prøver normalt ikke 2000 celler pr. Mikroliter, og procentdelen af inflammatoriske celler, såsom neutrofiler, er meget lav eller fraværende. Calciumkrystaller er hyppige i SF indsamlet fra OA-patienter. Selvom deres rolle i patogenesen af OA forbliver uklar, har de været forbundet med en mild inflammatorisk proces og en mere alvorlig sygdomsprogression. For nylig er calciumkrystaller blevet beskrevet i både de tidlige og sene stadier af OA, hvilket indikerer, at de kan spille en afgørende rolle i diagnosticering af forskellige kliniske undergrupper af OA og farmakologisk behandling. Det overordnede mål med SF-analyse i OA er todelt: at fastslå den ikke-inflammatoriske grad af SF og at fremhæve tilstedeværelsen af calciumkrystaller.

Slidgigt (OA) er en kompleks og multifaktoriel kronisk ledsygdom med en estimeret samlet global prævalens på 16% hos forsøgspersoner i alderen 15 år og derover og 23% hos forsøgspersoner i alderen 40 og derover1. Forekomsten af OA forventes at stige på grund af en aldrende befolkning og en stigning i risikofaktorer, såsom fedme og metabolisk syndrom2.

Blandt de største problemer forbundet med OA er vanskeligheden ved at diagnosticere sygdommen i sine tidlige stadier og aktuelt tilgængelige behandlinger begrænset til smertebehandling og symptomatiske langsomt virkende lægemidler (SYSADOA'er) så....

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Denne protokol er i overensstemmelse med retningslinjerne fra den etiske komité på Padova Universitetshospital. SF blev indsamlet med patientens samtykke fra knæleddene hos patienter, der fik terapeutisk arthrocentese til ledeffusion ved deres første præsentation til klinikken eller som reaktion på en arthritisk opblussen. Kontraindikationer til proceduren var: koagulopati, antikoagulerende medicin, hudlæsioner, dermatitis eller cellulitis, der ligger over leddet. Alle SF-prøver blev afidentificeret.

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Store led, der er påvirket af OA, er ofte hævede og producerer betydelige mængder SF, som drænes via arthrocentese15. De makroskopiske egenskaber ved SF evalueret umiddelbart efter arthrocentese indbefatter i det væsentlige mængde, farve, klarhed og viskositet17. På trods af deres lave specificitet giver de foreløbige data om graden af inflammation. Farven afhænger af SF-cellularitet og graden af fragmentering af ekstracellulære matrixmakromolekyler. SF i.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

I OA hjælper SF-analyse med at definere sygdomskarakteristika gennem enkle trin: totale og differentielle leukocyttal og søgning efter krystaller, herunder CPP og BCP. Desuden kan påvisning af MSU-krystaller fremhæve vigtige comorbiditeter.

På trods af lave omkostninger og enkel udførelse kan testens følsomhed og pålideligheden af resultaterne blive påvirket på grund af uerfarne analytikere - hovedsageligt da det vedrører krystalidentifikation. Analytikerens uddannelse og erfaring e.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Forfatterne ønsker at anerkende professor Leonardo Punzi for hans dyrebare mentorskab inden for synovialvæskeanalyse og Padova Universitetshospital for dets støtte.

....

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

NameCompanyCatalog NumberComments
Alizarin red SMerckA5533For BCP crystal search
Burker chamberMerckBR718905For total white blood cell count
Cover glassesMerckC7931For microscopic examination 
EDTA tubesBD368861For SF collection 
Glass slides MerckS8902For crystal search
Lambda filter (compensator)Any Refer to microscope companyFor crystal identification 
Malassez-Potain pipetteArtiglass54830000For dilution of synovial fluid
Methylene blue solutionMerck3978For total white blood cell count
Polarized microscope Leica, Nikon, othersDepending on the model and companyFor complete synovial fluid analysis
Polarizing lensAny Refer to microscope companyFor crystal identification 
Testsimplet Waldeck14386Supravital staining for cell differentiation

  1. Cui, A., et al. Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies. EClinicalMedicine. 29, 100587 (2020).
  2. Hunter, D. J., Bierma-Zeinstra, S. Osteoarthritis. Lancet. 393 (10182), 1745-1759 (2019).
  3. Mandell, B. F. . Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , (2022).
  4. Schmerling, R. H. Guidelines for the initial evaluation of the adult patient with acute musculoskeletal symptoms. Arthritis & Rheumatism. 39 (1), 1-8 (1996).
  5. Coakley, G., et al. RCGP and BSAC guidelines for management of the hot swollen joint in adults. Rheumatology. 45 (8), 1039-1041 (2006).
  6. Frallonardo, P., et al. Basic calcium phosphate and pyrophosphate crystals in early and late osteoarthritis: relationship with clinical indices and inflammation. Clinical Rheumatology. 37 (10), 2847-2853 (2018).
  7. Nalbant, S., et al. Synovial fluid features and their relations to osteoarthritis severity: new findings from sequential studies. Osteoarthritis Cartilage. 11 (1), 50-54 (2003).
  8. Fuerst, M., et al. Calcification of articular cartilage in human osteoarthritis. Arthritis & Rheumatism. 60 (9), 2694-2703 (2009).
  9. Campillo-Gimenez, L., et al. Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-κB activation and MAPK pathways. Frontiers in Immunology. 9, 2248 (2018).
  10. Pazár, B. Basic calcium phosphate crystals induce monocyte/macrophage IL-1β secretion through the NLRP3 inflammasome in vitro. The Journal of Immunology. 186 (4), 2495-2502 (2011).
  11. Martín, M. J. A., et al. Automated cell count in body fluids: a review. Advances in Laboratory Medicine. 2, 149-161 (2021).
  12. Seghezzi, , et al. Optimization of cellular analysis of synovial fluids by optical microscopy and automated count using the Sysmex XN body fluid mode. Clinica Chimica Acta. 462, 41-48 (2016).
  13. Reginato, A. J., Maldonado, I., Reginato, A. M., Falasca, G. F., O'Connor, C. R. Supravital staining of synovial fluid with Testsimplets. Diagnostic Cytopathology. 8 (2), 147-152 (1992).
  14. Lumbreras, B., et al. Analysis for crystals in synovial fluid: training of the analysts results in high consistency. Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (4), 612-615 (2005).
  15. Tieng, A., Franchin, G. Knee arthrocentesis in adults. Journal of Visualized Experiments. , e63135 (2022).
  16. Punzi, L., Oliviero, F. Arthrocentesis and synovial fluid analysis in clinical practice: value of sonography in difficult cases. Annals of the New York Academy of Sciences. 1154 (1), 152-158 (2009).
  17. Schumacher, H. R., Reginato, A. J. . Atlas of Synovial Fluid Analysis and Crystal Identification. , (1991).
  18. Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A. Detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model. Journal of Visualized Experiments. (116), e54270 (2016).
  19. Oliviero, F., Punzi, L. Basics of Polarized Light Microscopy. Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , 79-90 (2022).
  20. Paul, H., Reginato, A. J., Schumacher, H. R. Alizarin red S staining as a screening test to detect calcium compounds in synovial fluid. Arthritis & Rheumatism. 26 (2), 191-200 (1983).
  21. Favero, M., et al. Synovial fluid fetuin-A levels in patients affected by osteoarthritis with or without evidence of calcium crystals. Rheumatology. 58 (4), 729-730 (2019).
  22. Frallonardo, P., et al. Detection of calcium crystals in knee osteoarthritis synovial fluid: a comparison between polarized light and scanning electron microscopy. Journal of Clinical Rheumatology. 22 (7), 369-371 (2016).
  23. Peffers, M. J., Smagul, A., Anderson, J. R. Proteomic analysis of synovial fluid: current and potential uses to improve clinical outcomes. Expert Review of Proteomics. 16 (4), 287-302 (2019).

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved