JoVE Logo
Faculty Resource Center

Sign In

Summary

Abstract

Introduction

Protocol

Representative Results

Discussion

Acknowledgements

Materials

References

Medicine

Synovialvæskeanalyse for å identifisere slitasjegikt

Published: October 20th, 2022

DOI:

10.3791/64351

1Rheumatology Unit, Department of Medicine-DIMED, University of Padova

Synovialvæskeanalyse under overført, polarisert og kompensert lysmikroskopi brukes til å evaluere den inflammatoriske eller ikke-inflammatoriske naturen til en prøve gjennom enkle trinn. Det er spesielt nyttig i slitasjegikt for å oppdage kalsiumkrystaller og identifisere en mer alvorlig delmengde av slitasjegikt.

Leddvæske (SF) analyse er viktig i diagnostisering av slitasjegikt (OA). Makroskopiske og mikroskopiske egenskaper, inkludert totalt og differensielt antall hvite blodlegemer (WBC), bidrar til å definere den ikke-inflammatoriske naturen til SF, som er et kjennetegn for OA. Hos pasienter med OA overstiger WBC i SF-prøver vanligvis ikke 2000 celler per mikroliter, og prosentandelen inflammatoriske celler, som nøytrofiler, er svært lav eller fraværende. Kalsiumkrystaller er hyppige i SF samlet fra OA-pasienter. Selv om deres rolle i patogenesen av OA fortsatt er uklar, har de vært assosiert med en mild inflammatorisk prosess og en mer alvorlig sykdomsprogresjon. Nylig har kalsiumkrystaller blitt beskrevet i både de tidlige og sene stadiene av OA, noe som indikerer at de kan spille en viktig rolle i å diagnostisere forskjellige kliniske undergrupper av OA og farmakologisk behandling. Det overordnede målet med SF-analyse i OA er todelt: å fastslå den ikke-inflammatoriske graden av SF og å markere tilstedeværelsen av kalsiumkrystaller.

Osteoartrose (OA) er en kompleks og multifaktoriell kronisk leddsykdom, med en estimert samlet global prevalens på 16 % hos personer over 15 år og 23 % hos personer over40 år 1. Forekomsten av OA forventes å øke på grunn av en aldrende befolkning og en økning i risikofaktorer, som fedme og metabolsk syndrom2.

Blant de store problemene forbundet med OA er vanskeligheten med å diagnostisere sykdommen i sine tidlige stadier og tilgjengelige behandlinger begrenset til smertebehandling og symptomatiske langsomtvirkende stoffer (SYSADOAer) som glykosaminoglykaner. Diagnosen OA er basert på kliniske ....

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Den nåværende protokollen er i samsvar med retningslinjene til etikkomiteen ved Padova universitetssykehus. SF ble samlet med pasientens samtykke fra kneleddene hos pasienter som fikk terapeutisk arthrocentese for leddvæske ved deres første presentasjon til klinikken eller som respons på en artrittisk bluss. Kontraindikasjoner for prosedyren var: koagulopati, antikoagulerende medisiner, hudlesjoner, dermatitt eller cellulitt over leddet. Alle SF-prøvene ble avidentifisert.

1. Klarg.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Store ledd påvirket av OA er ofte hovne og produserer betydelige mengder SF, som dreneres via artrocentese15. De makroskopiske egenskapene til SF evaluert umiddelbart etter artrocentese inkluderer i hovedsak mengden, fargen, klarheten og viskositeten17. Til tross for deres lave spesifisitet, gir de foreløpige data om graden av betennelse. Fargen avhenger av SF-cellularitet og graden av fragmentering av ekstracellulære matriksmakromolekyler. SF samlet fra pasient.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

I OA bidrar SF-analyse til å definere sykdomskarakteristika gjennom enkle trinn: totalt og differensielt leukocyttall og søk etter krystaller, inkludert CPP og BCP. Videre kan påvisning av MSU-krystaller fremheve viktige komorbiditeter.

Til tross for lave kostnader og enkel utførelse, kan følsomheten av testene og påliteligheten av resultatene påvirkes på grunn av uerfarne analytikere, hovedsakelig når det gjelder krystallidentifikasjon. Opplæring og erfaring fra analytikeren er avgj.......

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Forfatterne ønsker å anerkjenne professor Leonardo Punzi for hans dyrebare mentorskap innen synovialvæskeanalyse og Padova universitetssykehus for sin støtte.

....

Log in or to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

NameCompanyCatalog NumberComments
Alizarin red SMerckA5533For BCP crystal search
Burker chamberMerckBR718905For total white blood cell count
Cover glassesMerckC7931For microscopic examination 
EDTA tubesBD368861For SF collection 
Glass slides MerckS8902For crystal search
Lambda filter (compensator)Any Refer to microscope companyFor crystal identification 
Malassez-Potain pipetteArtiglass54830000For dilution of synovial fluid
Methylene blue solutionMerck3978For total white blood cell count
Polarized microscope Leica, Nikon, othersDepending on the model and companyFor complete synovial fluid analysis
Polarizing lensAny Refer to microscope companyFor crystal identification 
Testsimplet Waldeck14386Supravital staining for cell differentiation

  1. Cui, A., et al. Global, regional prevalence, incidence and risk factors of knee osteoarthritis in population-based studies. EClinicalMedicine. 29, 100587 (2020).
  2. Hunter, D. J., Bierma-Zeinstra, S. Osteoarthritis. Lancet. 393 (10182), 1745-1759 (2019).
  3. Mandell, B. F. . Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , (2022).
  4. Schmerling, R. H. Guidelines for the initial evaluation of the adult patient with acute musculoskeletal symptoms. Arthritis & Rheumatism. 39 (1), 1-8 (1996).
  5. Coakley, G., et al. RCGP and BSAC guidelines for management of the hot swollen joint in adults. Rheumatology. 45 (8), 1039-1041 (2006).
  6. Frallonardo, P., et al. Basic calcium phosphate and pyrophosphate crystals in early and late osteoarthritis: relationship with clinical indices and inflammation. Clinical Rheumatology. 37 (10), 2847-2853 (2018).
  7. Nalbant, S., et al. Synovial fluid features and their relations to osteoarthritis severity: new findings from sequential studies. Osteoarthritis Cartilage. 11 (1), 50-54 (2003).
  8. Fuerst, M., et al. Calcification of articular cartilage in human osteoarthritis. Arthritis & Rheumatism. 60 (9), 2694-2703 (2009).
  9. Campillo-Gimenez, L., et al. Inflammatory potential of four different phases of calcium pyrophosphate relies on NF-κB activation and MAPK pathways. Frontiers in Immunology. 9, 2248 (2018).
  10. Pazár, B. Basic calcium phosphate crystals induce monocyte/macrophage IL-1β secretion through the NLRP3 inflammasome in vitro. The Journal of Immunology. 186 (4), 2495-2502 (2011).
  11. Martín, M. J. A., et al. Automated cell count in body fluids: a review. Advances in Laboratory Medicine. 2, 149-161 (2021).
  12. Seghezzi, , et al. Optimization of cellular analysis of synovial fluids by optical microscopy and automated count using the Sysmex XN body fluid mode. Clinica Chimica Acta. 462, 41-48 (2016).
  13. Reginato, A. J., Maldonado, I., Reginato, A. M., Falasca, G. F., O'Connor, C. R. Supravital staining of synovial fluid with Testsimplets. Diagnostic Cytopathology. 8 (2), 147-152 (1992).
  14. Lumbreras, B., et al. Analysis for crystals in synovial fluid: training of the analysts results in high consistency. Annals of the Rheumatic Diseases. 64 (4), 612-615 (2005).
  15. Tieng, A., Franchin, G. Knee arthrocentesis in adults. Journal of Visualized Experiments. , e63135 (2022).
  16. Punzi, L., Oliviero, F. Arthrocentesis and synovial fluid analysis in clinical practice: value of sonography in difficult cases. Annals of the New York Academy of Sciences. 1154 (1), 152-158 (2009).
  17. Schumacher, H. R., Reginato, A. J. . Atlas of Synovial Fluid Analysis and Crystal Identification. , (1991).
  18. Mopin, A., Driss, V., Brinster, C. A. Detailed protocol for characterizing the murine C1498 cell line and its associated leukemia mouse model. Journal of Visualized Experiments. (116), e54270 (2016).
  19. Oliviero, F., Punzi, L. Basics of Polarized Light Microscopy. Synovial Fluid Analysis and the Evaluation of Patients with Arthritis. , 79-90 (2022).
  20. Paul, H., Reginato, A. J., Schumacher, H. R. Alizarin red S staining as a screening test to detect calcium compounds in synovial fluid. Arthritis & Rheumatism. 26 (2), 191-200 (1983).
  21. Favero, M., et al. Synovial fluid fetuin-A levels in patients affected by osteoarthritis with or without evidence of calcium crystals. Rheumatology. 58 (4), 729-730 (2019).
  22. Frallonardo, P., et al. Detection of calcium crystals in knee osteoarthritis synovial fluid: a comparison between polarized light and scanning electron microscopy. Journal of Clinical Rheumatology. 22 (7), 369-371 (2016).
  23. Peffers, M. J., Smagul, A., Anderson, J. R. Proteomic analysis of synovial fluid: current and potential uses to improve clinical outcomes. Expert Review of Proteomics. 16 (4), 287-302 (2019).

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved