Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Cancer Research
يقدم هذا البروتوكول تقنية آلية عالية الإنتاجية قائمة على الصور لتحديد المركبات التي تعدل قتل خلايا سرطان الثدي بوساطة الخلايا القاتلة الطبيعية في وجود جسم مضاد علاجي مضاد ل HER-2.
أحدث العلاج المناعي بالأجسام المضادة الخاصة بالمستضد أو مثبطات نقاط التفتيش المناعية ثورة في علاج سرطان الثدي. يمكن استهداف خلايا سرطان الثدي التي تعبر عن مستقبل عامل نمو البشرة HER2 بواسطة الجسم المضاد ل HER-2 تراستوزوماب. السمية الخلوية المعتمدة على الأجسام المضادة (ADCC) هي آلية مهمة متورطة في العمل المضاد للأورام ل HER-2. يمكن التعرف على Trastuzumab المرتبط بالخلايا السرطانية بواسطة مستقبلات Fc للخلايا المستجيبة ADCC (على سبيل المثال ، الخلايا القاتلة الطبيعية (NK) ، والبلاعم ، والخلايا المحببة) ، مما يؤدي إلى النشاط السام للخلايا لهذه الخلايا المناعية مما يؤدي إلى موت الخلايا السرطانية. شرعنا في تطوير مقايسة قائمة على الصور لقياس كمية ADCC لتحديد مركبات معدل ADCC الجديدة عن طريق فحص المحتوى العالي. في الفحص ، يتم زراعة خلايا سرطان الثدي HER2 JIMT-1 بشكل مفرط مع خلايا NK-92 في وجود تراستوزوماب ، ويتم قياس موت الخلايا المستهدفة عن طريق الفحص المجهري الآلي وتحليل الصور الكمي. تتميز الخلايا المستهدفة عن الخلايا المستجيبة بناء على مضان EGFP. نوضح كيف يمكن اختبار المكتبات المركبة في الفحص لتحديد أدوية ADCC المعدلة. لهذا الغرض ، تم إنشاء لوحة اختبار مكتبة مركبة باستخدام مواد كيميائية دقيقة تم اختيارها عشوائيا من رف المختبر. كما تم تضمين ثلاثة مركبات مزعزعة للاستقرار من الأنابيب الدقيقة (كولشيسين ، فينكريستين ، بودوفيلوتوكسين) من المتوقع أن تتداخل مع هجرة الخلايا القاتلة الطبيعية وتحللها في مكتبة الاختبار. حددت شاشة الاختبار جميع مركبات التحكم الإيجابية الثلاثة كنتائج تثبت مدى ملاءمة الطريقة لتحديد الأدوية المعدلة ل ADCC في مكتبة كيميائية. باستخدام هذا الفحص ، يمكن إجراء شاشات المكتبة المركبة لتحديد المركبات المعززة ل ADCC والتي يمكن استخدامها كعوامل علاجية مساعدة لعلاج المرضى الذين يتلقون علاجات مناعية مضادة للسرطان. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن أيضا استخدام الطريقة لتحديد أي آثار جانبية غير مرغوب فيها مثبطة ل ADCC للأدوية العلاجية التي يتناولها مرضى السرطان لمؤشرات مختلفة.
يمثل العلاج المناعي بالأجسام المضادة للسرطان أو مثبطات نقاط التفتيش المناعية أو الخلايا التائية المعبرة عن مستقبلات المستضد الخيمري (CAR-T) نهجا قويا لعلاج السرطان1،2،3. Trastuzumab هو جسم مضاد أحادي النسيلة متوافق مع البشر HER-2 (مستقبل عامل نمو البشرة البشري 2) يستخدم لعلاج المرحلة المبكرة الإيجابية HER-2 أو سرطان الثدي النقيلي ، وكذلك سرطان المعدة النقيلي الإيجابي HER-24،5،6. وهو يعمل في المقام الأول عن طريق تثبيط تأثير تحفيز الانتشار لعامل نمو البشرة4. ومع....
لتوضيح كيفية عمل الفحص في الحياة الواقعية ، أنشأنا مكتبة اختبار من 16 مركبا تم اختيارها عشوائيا من أرفف المختبر (الشكل 3). بالإضافة إلى ذلك ، تم تضمين DMSO أيضا كعنصر تحكم سلبي ، وثلاثة مركبات مثبطة لبلمرة الأنابيب الدقيقة (كولشيسين ، فينكريستين ، وبودوفيلوتوكسين) كضوابط إيجاب.......
تم وصف رد فعل ADCC منذ وقت طويل نسبيا. كما تم وصف الأحداث الجزيئية الرئيسية للعملية19. تتراوح طرق قياس ADCC من مقايسة إطلاق الكروم المشع القياسي الذهبي ، ومقايسات إطلاق الإنزيم السيتوبلازمي إلى العديد من قياس التدفق الخلوي القائم على التألق أو مقايسات الصفائح الدقيقة20
تلقت LV تمويلا من منح المكتب الوطني للبحث والتطوير والابتكار GINOP-2.3.2-15-2016-00010 TUMORDNS "، GINOP-2.3.2-15-2016-00048-STAYALIVE و OTKA K132193 ، K147482. تم الحصول على خلايا CD16.176V.NK-92 من الدكتور كيري س. كامبل (مركز فوكس تشيس ، فيلابدلفيا ، بنسلفانيا ، نيابة عن برينك بيولوجيكس ، lnc. San Diego، CA) ، محمية ببراءات اختراع في جميع أنحاء العالم ، وتم ترخيصها من قبل Nantkwest، lnc. يعرب المؤلفون عن امتنانهم لجيورجي فيرب وأرباد زوور لمساعدتهم في استخدام خط الخلايا NK-92 وعلى المشورة الفنية.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
5-fluorouracil | Applichem | A7686 | in compound library |
96-well Cell Carrier Ultra plate | PerkinElmer | LLC 6055302 | |
Betulin | Sigma | B9757 | in compound library |
CD16.176V.NK92 cells | Nankwest Inc. | ||
Cerulenin | ChemCruz | sc-396822 | in compound library |
Cisplatin | Santa Cruz Biotechnology | sc-200896 | in compound library |
Colchicine | Sigma | C9754 | in compound library |
Concanavalin-A | Calbiochem | 234567 | in compound library |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | in compound library |
DMEM/F-12 medium | Sigma | D8437 | in JIMT-1 EGFP medium |
DMSO | Sigma | D2650 | in compound library |
Etoposide | Sigma | E1383 | E1383 |
Fetal bovine serum (FBS) | Biosera | FB-1090/500 | JIMT-1 EGFP and NK medium |
Fisetin | Sigma | F4043 | in compound library |
Freedom EVO liquid handling robot | TECAN | ||
Gallotannin | Fluka Chemical Corp. | 16201 | in compound library |
Glutamine | Gibco | 35,050–061 | in NK medium |
Harmony software | PerkinElmer | ||
Humanized anti-HER2 monoclonal antibody (Herzuma) | EGIS Pharmaceuticals, Budapest Hungary | N/A | |
Humulin R (insulin) | Eli Lilly | HI0219 | JIMT-1 EGFP medium |
IL-2 | Novartis Hungária Kft. | PHC0026 | in NK medium |
Isatin | Sigma | 114618 | in compound library |
MEM Non-essential Amino Acids (MEM-NEAA) | Gibco | 11,140–050 | in NK medium |
Na-pyruvate | Lonza | BE13-115E | in NK medium |
Naringenin | Sigma | N5893 | in compound library |
NQDI-1 | Sigma | SML0185 | in compound library |
Opera Phenix High-Content Analysis equipment | PerkinElmer | ||
Penicillin–streptomycin | Biosera | LM-A4118 | JIMT-1 EGFP and NK medium |
Pentoxyfilline | Sigma | P1784 | in compound library |
Phosphate buffered saline (PBS) | Lonza | BE17-517Q | to wash the cells |
Podophyllotoxin | Sigma | P4405 | in compound library |
Quercetin | Sigma | Q4951 | in compound library |
Tannic acid | Sigma | T8406 | in compound library |
Temozolomide | Sigma | T2577 | in compound library |
Trypan blue 0.4% solution | Sigma | T8154 | for cell counting |
Vincristine sulfate | Sigma | V0400000 | in compound library |
α-MEM | Sigma | M8042 | in NK medium |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved