Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Cancer Research
यह प्रोटोकॉल एक चिकित्सीय एंटी-एचईआर -2 एंटीबॉडी की उपस्थिति में प्राकृतिक हत्यारा सेल-मध्यस्थता स्तन कैंसर सेल हत्या को संशोधित करने वाले यौगिकों की पहचान करने के लिए एक स्वचालित, छवि-आधारित उच्च-थ्रूपुट तकनीक प्रस्तुत करता है।
एंटीजन-विशिष्ट एंटीबॉडी या प्रतिरक्षा चेकपॉइंट इनहिबिटर के साथ इम्यूनोथेरेपी ने स्तन कैंसर की चिकित्सा में क्रांति ला दी है। एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर रिसेप्टर एचईआर 2 को व्यक्त करने वाली स्तन कैंसर कोशिकाओं को एंटी-एचईआर -2 एंटीबॉडी ट्रास्टुज़ुमाब द्वारा लक्षित किया जा सकता है। एंटीबॉडी-निर्भर सेलुलर साइटोटॉक्सिसिटी (एडीसीसी) एचईआर -2 की एंटीट्यूमर कार्रवाई में फंसा हुआ एक महत्वपूर्ण तंत्र है। कैंसर कोशिकाओं से बंधे ट्रास्टुज़ुमाब को एडीसीसी प्रभावक कोशिकाओं (जैसे, प्राकृतिक हत्यारा (एनके) कोशिकाओं, मैक्रोफेज और ग्रैनुलोसाइट्स) के एफसी रिसेप्टर्स द्वारा पहचाना जा सकता है, जिससे इन प्रतिरक्षा कोशिकाओं की साइटोटोक्सिक गतिविधि शुरू होती है जिससे कैंसर कोशिका मृत्यु हो जाती है। हमने उच्च-सामग्री स्क्रीनिंग द्वारा उपन्यास एडीसीसी मॉड्यूलेटर यौगिकों की पहचान करने के लिए एडीसीसी की मात्रा का ठहराव के लिए एक छवि-आधारित परख विकसित करने के लिए तैयार किया। परख में, एचईआर 2 ने जेआईएमटी -1 स्तन कैंसर कोशिकाओं को ट्रास्टुज़ुमाब की उपस्थिति में एनके -92 कोशिकाओं के साथ सह-संवर्धित किया है, और लक्ष्य कोशिका मृत्यु को स्वचालित माइक्रोस्कोपी और मात्रात्मक छवि विश्लेषण द्वारा निर्धारित किया जाता है। लक्ष्य कोशिकाओं को उनके ईजीएफपी प्रतिदीप्ति के आधार पर प्रभावक कोशिकाओं से अलग किया जाता है। हम दिखाते हैं कि एडीसीसी मॉड्यूलेटर दवाओं की पहचान करने के लिए परख में यौगिक पुस्तकालयों का परीक्षण कैसे किया जा सकता है। इस उद्देश्य के लिए, लैब शेल्फ से यादृच्छिक रूप से चयनित ठीक रसायनों का उपयोग करके एक यौगिक पुस्तकालय परीक्षण प्लेट स्थापित की गई थी। एनके सेल माइग्रेशन और डिग्रैनुलेशन में हस्तक्षेप करने के लिए अपेक्षित तीन सूक्ष्मनलिकाएं अस्थिर यौगिकों (कोलचिसीन, विन्क्रिस्टिन, पोडोफिलोटॉक्सिन) को भी परीक्षण पुस्तकालय में शामिल किया गया था। परीक्षण स्क्रीन ने सभी तीन सकारात्मक नियंत्रण यौगिकों को एक रासायनिक पुस्तकालय में एडीसीसी-संशोधित दवाओं की पहचान करने के लिए विधि की उपयुक्तता साबित करने वाले हिट के रूप में पहचाना। इस परख के साथ, एडीसीसी-बढ़ाने वाले यौगिकों की पहचान करने के लिए यौगिक लाइब्रेरी स्क्रीन का प्रदर्शन किया जा सकता है जिनका उपयोग एंटीकैंसर इम्यूनोथेरेपी प्राप्त करने वाले रोगियों के उपचार के लिए सहायक चिकित्सीय एजेंटों के रूप में किया जा सकता है। इसके अलावा, विधि का उपयोग विभिन्न संकेतों के लिए कैंसर रोगियों द्वारा ली गई चिकित्सीय दवाओं के किसी भी अवांछनीय एडीसीसी-अवरोधक दुष्प्रभावों की पहचान करने के लिए भी किया जा सकता है।
एंटीकैंसर एंटीबॉडी, प्रतिरक्षा चेकपॉइंट इनहिबिटर, या चिमेरिक एंटीजन रिसेप्टर-व्यक्त टी (सीएआर-टी) कोशिकाओं के साथ इम्यूनोथेरेपी कैंसर के उपचारके लिए एक शक्तिशाली दृष्टिकोण का प्रतिनिधित्व करती है। ट्रास्टुज़ुमाब एक मानवकृत मोनोक्लोनल एंटी-एचईआर -2 (मानव एपिडर्मल ग्रोथ फैक्टर रिसेप्टर 2) एंटीबॉडी है जिसका उपयोग एचईआर -2 पॉजिटिव प्रारंभिक चरण या मेटास्टैटिक स्तन कैंसर के इलाज के लिए किया जाता है, साथ ही एचईआर -2 पॉजिटिव मेटास्टैटिक गैस्ट्रिक कैंसर 4,5,6। यह मुख्य रूप से एपिडर्मल विकास ....
एलवी को राष्ट्रीय अनुसंधान, विकास और नवाचार कार्यालय अनुदान जीआईएनओपी-2.3.2-15-2016-00010 ट्यूमरडीएनएस", जीआईएनओपी-2.3.2-15-2016-00048-स्टेअलाइव और ओटीकेए के132193, के147482 से धन प्राप्त हुआ। सीडी 16.176वी.एनके -92 कोशिकाओं को ब्रिंक बायोलॉजिक्स, एलएनसी की ओर से डॉ केरी एस कैंपबेल (फॉक्स चेस सेंटर, फिलापेडल्फिया, पीए) से प्राप्त किया गया था। सैन डिएगो, सीए), दुनिया भर में पेटेंट द्वारा संरक्षित हैं, और नांटकवेस्ट, एलएनसी द्वारा लाइसेंस प्राप्त थे। लेखक एनके -92 सेल लाइन के उपयोग के साथ उनकी मदद और तकनीकी सलाह के लिए ग्योर्गी वेरेब और आर्पड स्ज़ोर के आभारी हैं।
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
5-fluorouracil | Applichem | A7686 | in compound library |
96-well Cell Carrier Ultra plate | PerkinElmer | LLC 6055302 | |
Betulin | Sigma | B9757 | in compound library |
CD16.176V.NK92 cells | Nankwest Inc. | ||
Cerulenin | ChemCruz | sc-396822 | in compound library |
Cisplatin | Santa Cruz Biotechnology | sc-200896 | in compound library |
Colchicine | Sigma | C9754 | in compound library |
Concanavalin-A | Calbiochem | 234567 | in compound library |
Dexamethasone | Sigma | D4902 | in compound library |
DMEM/F-12 medium | Sigma | D8437 | in JIMT-1 EGFP medium |
DMSO | Sigma | D2650 | in compound library |
Etoposide | Sigma | E1383 | E1383 |
Fetal bovine serum (FBS) | Biosera | FB-1090/500 | JIMT-1 EGFP and NK medium |
Fisetin | Sigma | F4043 | in compound library |
Freedom EVO liquid handling robot | TECAN | ||
Gallotannin | Fluka Chemical Corp. | 16201 | in compound library |
Glutamine | Gibco | 35,050–061 | in NK medium |
Harmony software | PerkinElmer | ||
Humanized anti-HER2 monoclonal antibody (Herzuma) | EGIS Pharmaceuticals, Budapest Hungary | N/A | |
Humulin R (insulin) | Eli Lilly | HI0219 | JIMT-1 EGFP medium |
IL-2 | Novartis Hungária Kft. | PHC0026 | in NK medium |
Isatin | Sigma | 114618 | in compound library |
MEM Non-essential Amino Acids (MEM-NEAA) | Gibco | 11,140–050 | in NK medium |
Na-pyruvate | Lonza | BE13-115E | in NK medium |
Naringenin | Sigma | N5893 | in compound library |
NQDI-1 | Sigma | SML0185 | in compound library |
Opera Phenix High-Content Analysis equipment | PerkinElmer | ||
Penicillin–streptomycin | Biosera | LM-A4118 | JIMT-1 EGFP and NK medium |
Pentoxyfilline | Sigma | P1784 | in compound library |
Phosphate buffered saline (PBS) | Lonza | BE17-517Q | to wash the cells |
Podophyllotoxin | Sigma | P4405 | in compound library |
Quercetin | Sigma | Q4951 | in compound library |
Tannic acid | Sigma | T8406 | in compound library |
Temozolomide | Sigma | T2577 | in compound library |
Trypan blue 0.4% solution | Sigma | T8154 | for cell counting |
Vincristine sulfate | Sigma | V0400000 | in compound library |
α-MEM | Sigma | M8042 | in NK medium |
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