Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Cancer Research
रोगी-व्युत्पन्न ऑर्गेनोइड्स (पीडीओ) एक त्रि-आयामी (3 डी) संस्कृति है जो विट्रो में ट्यूमर के वातावरण की नकल कर सकती है। उच्च श्रेणी के सीरस डिम्बग्रंथि के कैंसर में, पीडीओ नए बायोमाकर्स और चिकित्सीय का अध्ययन करने के लिए एक मॉडल का प्रतिनिधित्व करते हैं।
ऑर्गेनोइड्स 3 डी गतिशील ट्यूमर मॉडल हैं जिन्हें रोगी-व्युत्पन्न डिम्बग्रंथि ट्यूमर ऊतक, जलोदर, या फुफ्फुस द्रव से सफलतापूर्वक उगाया जा सकता है और डिम्बग्रंथि के कैंसर के लिए नए चिकित्सीय और भविष्य कहनेवाला बायोमार्कर की खोज में सहायता करता है। ये मॉडल क्लोनल विषमता, ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट, और सेल-सेल और सेल-मैट्रिक्स इंटरैक्शन को पुन: परिभाषित करते हैं। इसके अतिरिक्त, उन्हें प्राथमिक ट्यूमर को रूपात्मक, साइटोलॉजिकल, इम्यूनोहिस्टोकेमिकल और आनुवंशिक रूप से मेल खाने के लिए दिखाया गया है। इस प्रकार, ऑर्गेनोइड ट्यूमर कोशिकाओं और ट्यूमर माइक्रोएन्वायरमेंट पर शोध की सुविधा प्रदान करते हैं और सेल लाइनों से बेहतर होते हैं। वर्तमान प्रोटोकॉल 97% से अधिक सफलता दर के साथ रोगी ट्यूमर, जलोदर और फुफ्फुस द्रव के नमूनों से रोगी-व्युत्पन्न डिम्बग्रंथि के कैंसर ऑर्गेनोइड उत्पन्न करने के लिए अलग-अलग तरीकों का वर्णन करता है। रोगी के नमूने यांत्रिक और एंजाइमेटिक पाचन दोनों द्वारा सेलुलर निलंबन में अलग किए जाते हैं। कोशिकाओं को तब एक तहखाने झिल्ली निकालने (बीएमई) का उपयोग करके चढ़ाया जाता है और उच्च श्रेणी के सीरस डिम्बग्रंथि के कैंसर (एचजीएसओसी) के संवर्धन के लिए विशिष्ट पूरक युक्त अनुकूलित विकास मीडिया के साथ समर्थित किया जाता है। प्रारंभिक ऑर्गेनोइडबनाने के बाद, पीडीओ दीर्घकालिक संस्कृति को बनाए रख सकते हैं, जिसमें बाद के प्रयोगों के लिए विस्तार के लिए पासिंग शामिल है।
2021 में, संयुक्त राज्य अमेरिका में लगभग 21,410 महिलाओं को उपकला डिम्बग्रंथि के कैंसर का निदान किया गया था, और 12,940 महिलाओं कीइस बीमारी से मृत्यु हो गई थी। यद्यपि सर्जरी और कीमोथेरेपी में पर्याप्त प्रगति हुई है, उन्नत बीमारी वाले 70% से अधिक रोगी कीमोथेरेपी प्रतिरोध विकसित करते हैं और निदान2,3 के 5 साल के भीतर मर जाते हैं। इस प्रकार, इस घातक बीमारी के इलाज के लिए नई रणनीतियों और प्रीक्लिनिकल अनुसंधान के लिए प्रतिनिधि, विश्वसनीय मॉडल की तत्काल आवश्यकता है।
प्राथमिक डिम्बग्रंथि ट्यूमर से निर्मित कैंसर सेल लाइनें और रोगी-व्युत्पन्न जेनोग्राफ्ट्स (पीडीएक्स) डिम....
अनुसंधान के लिए एकत्र किए गए सभी मानव ऊतक नमूने संस्थागत समीक्षा बोर्ड (आईआरबी) -अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार प्राप्त किए गए थे। नीचे उल्लिखित प्रोटोकॉल एक बाँझ मानव ऊतक संस्कृति वातावरण में किए गए थे.......
डिम्बग्रंथि का कैंसर निदान में अपने उन्नत चरण के साथ-साथ कीमोथेरेपी प्रतिरोध के सामान्य विकास के कारण बेहद घातक है। कैंसर सेल लाइनों और पीडीएक्स मॉडल का उपयोग करके डिम्बग्रंथि के कैंसर अनुसंधान में ?.......
हम इस प्रोटोकॉल को स्थापित करने में एमडी, पीएचडी रॉन बोस के मार्गदर्शन और बारबरा ब्लाचट, एमडी की सहायता के लिए आभारी हैं। हम इस परियोजना के समर्थन के लिए सेंट लुइस के प्रसूति और स्त्री रोग विभाग और स्त्री रोग संबंधी ऑन्कोलॉजी विभाग, वाशिंगटन विश्वविद्यालय के डीन स्कॉलर प्रोग्राम और प्रजनन वैज्ञानिक विकास कार्यक्रम में वाशिंगटन विश्वविद्यालय के स्कूल ऑफ मेडिसिन को भी स्वीकार करना चाहते हैं।
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
1% HEPES | Life Technologies | 15630080 | |
1% Penicillin-Streptomycin | Fisher Scientific | 30002CI | |
1.5 mL Eppendorf Tubes | Genesee Scientific | 14125 | |
10 cm Tissue Culture Dish | TPP | 93100 | |
10 mL Serological Pipet | |||
100 µm Cell Filter | MidSci | 100ICS | |
15 mL centrifuge tubes | Corning | 430052 | |
2 mL Cryovial | Simport Scientific | T301-2 | |
2% Paraformaldehyde Fixative | Sigma-Aldrich | ||
37 °C water bath | NEST | 602052 | |
3dGRO R-Spondin-1 Conditioned Media Supplement | Millipore Sigma | SCM104 | |
6 well plates | TPP | 92006 | |
70% Ethanol | Sigma-Aldrich | R31541GA | |
A83-01 | Sigma-Aldrich | SML0788 | |
Advanced DMEM/F12 | ThermoFisher | 12634028 | |
Agar | Lamda Biotech | C121 | |
B-27 | Life Technologies | 17504044 | |
Centrifuge | |||
Cultrex Type 2 | R&D Systems | 3533-010-02 | basement membrane extract |
DNase I | New England Bio Labs | M0303S | |
DNase I Reaction Buffer | New England Bio Labs | M0303S | |
EGF | PeproTech | AF-100-15 | |
FBS | Sigma-Aldrich | F2442 | |
FGF-10 | PeproTech | 100-26 | |
FGF2 | PeproTech | 100-18B | |
gentleMACS C Tubes | Miltenyi BioTech | 130-096-334 | |
gentleMACS Octo Dissociator with Heaters | Miltenyi BioTech | 130-096-427 | We use the manufacturers protocol. |
GlutaMAX | Life Technologies | 35050061 | dipeptide, L-alanyl-L-glutamine |
Hematoxylin and Eosin Staining Kit | Fisher Scientific | NC1470670 | |
Histoplast Paraffin Wax | Fisher Scientific | 22900700 | |
Microcentrifuge | |||
Mr. Frosty Freezing Container | Fisher Scientific | 07202363S | |
N-acetylcysteine | Sigma-Aldrich | A9165 | |
Nicotinamide | Sigma-Aldrich | N0636 | |
p1000 Pipette with Tips | |||
p200 Pipette with Tips | |||
Pasteur Pipettes 9" | Fisher Scientific | 1367820D | |
PBS | Fisher Scientific | MT21031CM | |
Pipet Controller | |||
Prostaglandin E2 | R&D Systems | 2296 | |
Puromycin | ThermoFisher | A1113802 | |
Recombinant Murine Noggin | PeproTech | 250-38 | |
Recovery Cell Culture Freezing Medium | Invitrogen | 12648010 | |
Red Blood Cell Lysis Buffer | BioLegend | 420301 | |
ROCK Inhibitor (Y-27632) | R&D Systems | 1254/1 | |
SB202190 | Sigma-Aldrich | S7076 | |
T75 Flask | MidSci | TP90076 | |
Tissue Culture Hood | |||
Tissue Embedding Cassette | |||
TrypLE Express | Invitrogen | 12604013 | animal origin-free, recombinant enzyme |
Type II Collagenase | Life Technologies | 17101015 | |
Vortex |
ABOUT JoVE
Copyright © 2024 MyJoVE Corporation. All rights reserved