Justering av synlig lys optisk koherens tomografi fibergrammer med konfokale bilder av samme mus netthinnen

Den nåværende protokollen skisserer trinnene for justering in vivo synlig-lys optisk koherens tomografi fibergrafi (vis-OCTF) bilder med ex vivo konfokale bilder av samme mus retina med det formål å verifisere observert retinal ganglion celle aksonbunt morfologi i in vivo bilder.

I de senere år har in vivo retinal imaging, som gir ikke-invasiv, sanntid og langsgående informasjon om biologiske systemer og prosesser, blitt brukt i økende grad for å oppnå en objektiv vurdering av nevrale skader i øyesykdommer. Ex vivo konfokal avbildning av samme netthinne er ofte nødvendig for å validere in vivo-funnene , spesielt i dyreforsøk. I denne studien demonstrerte vi en metode for å justere et ex vivo konfokalt bilde av musehinnen med sine in vivo-bilder . En ny klinisk klar bildebehandlingsteknologi kalt synlig lys optisk koherens tomografi fibergrafi (vis-OCTF) ble brukt til å skaffe in vivo bilder av musehinnen. Vi utførte deretter konfokal avbildning av samme netthinne som "gullstandarden" for å validere in vivo vis-OCTF-bildene. Denne studien muliggjør ikke bare videre undersøkelse av molekylære og cellulære mekanismer, men etablerer også et grunnlag for en sensitiv og objektiv evaluering av nevrale skader in vivo.

Retinal ganglionceller (RGC) spiller en kritisk rolle i visuell informasjonsbehandling, mottar synaptiske innganger gjennom deres dendritiske trær i det indre plexiforme laget (IPL) og overfører informasjonen via deres axoner i retinal nervefiberlaget (RNFL) til hjernen 1,2,3,4. Ved syke tilstander som glaukom kan tidlig RGC-degenerasjon resultere i subtile endringer i RNFL, ganglioncellelaget (GCL), IPL og optisk nerve hos både pasienter og gnagermodeller 5,6,7,8,9.^<....

Alle dyreprosedyrer ble godkjent av Institutional Animal Care and Use Committee ved University of Virginia og i samsvar med retningslinjene for bruk av dyr fra National Institute of Health (NIH). Se materialfortegnelsen for detaljer relatert til alle materialer, reagenser og instrumenter som brukes i denne protokollen.

1. In vivo vis-OCT-avbildning

1. Vis-OCT-systemet
   1. Se for deg musens øyne ved hjelp av et lite dyr vis-OCT-system som br.......

Det sammensatte vis-OCT-fibergrammet sammenlignes med det tilsvarende konfokale bildet av flatmontert retina immunfarget med Tuj-1 for RGC-aksoner (figur 1D, topppanel). Aksonbunter avbildet av vis-OCTF kan matches med Tu-j1-merkede aksonbunter på konfokalbildet. Blodkar viser vanligvis gjenkjennelige forgreningsstrukturer sammenlignet med omkringliggende aksonbunter i fibergrambilder, som kan matches med ICAM-2-merkede blodkar på konfokalbildet (figur 1D, ned.......

Det er to trinn i denne protokollen som krever oppmerksomhet. For det første er det nødvendig å sikre at dyret er under dyp anestesi og at øynene er fullt utvidet før vis-OCT avbildning. Hvis musene ikke er tilstrekkelig bedøvet, kan deres raske pust føre til ustabile bevegelser av ansiktsbildene, noe som kan påvirke kvaliteten på fibergrammet negativt. Videre kan utilstrekkelig utvidelse også ha en negativ innvirkning på bildekvaliteten, siden iris kan hindre lyset og hindre det i å nå netthinnen........

Denne studien støttes av DrDeramus Research Foundation Shaffer Grant, 4-CA Cavalier Collaborative Award, R01EY029121, R01EY035088 og Knights Templar Eye Foundation.