Измерение параметров кальция и сократимости кальция в индуцированных плюрипотентных стволовых клетках человека в режиме реального времени

Индуцированные плюрипотентные кардиомиоциты, полученные из стволовых клеток человека (hiPSC-CMs), представляют собой мощный инструмент для изучения мутационно-опосредованных изменений функции кардиомиоцитов и определения эффектов стрессоров и медикаментозных вмешательств. В данном исследовании показано, что данная оптическая система является мощным инструментом для оценки функциональных параметров hiPSC-CM в 2D. Используя эту платформу, можно выполнять парные измерения в хорошо сохраненной температурной среде на различных макетах пластин. Более того, эта система предоставляет исследователям мгновенный анализ данных.

В данной работе описан метод измерения сократительной способности немодифицированных ИПСК-КМ. Кинетика сжатия измеряется при 37 °C на основе изменений корреляции пикселей относительно системы отсчета, взятой при релаксации при частоте дискретизации 250 Гц. Кроме того, одновременные измерения внутриклеточных транзиентов кальция могут быть получены путем загрузки в клетку кальций-чувствительного флуорофора, такого как Fura-2. С помощью гиперпереключателя можно проводить ратиометрические измерения кальция на пятне освещения диаметром 50 мкм, что соответствует площади измерений сократимости.