Hibridação in situ por fluorescência de montagem total para estudo da espermatogênese no mosquito Anopheles

A espermatogênese é um processo biológico complexo durante o qual as células diploides sofrem sucessivas divisões mitóticas e meióticas seguidas por grandes mudanças estruturais para formar espermatozoides haploides. Além do aspecto biológico, o estudo da espermatogênese é de suma importância para o entendimento e desenvolvimento de tecnologias genéticas como a movimentação gênica e as distorções sintéticas da razão sexual, que, alterando a herança mendeliana e a razão sexual espermática, respectivamente, poderiam ser utilizadas no controle de populações de insetos-praga. Essas tecnologias têm se mostrado muito promissoras em ambientes de laboratório e poderiam ser usadas para controlar populações selvagens de mosquitos Anopheles , que são vetores da malária. Devido à simplicidade da anatomia testicular e sua importância médica, Anopheles gambiae, um dos principais vetores da malária na África subsaariana, representa um bom modelo citológico para o estudo da espermatogênese. Este protocolo descreve como a hibridação in situ por fluorescência de montagem inteira (WFISH) pode ser usada para estudar as mudanças dramáticas na estrutura nuclear celular através da espermatogênese usando sondas fluorescentes que coram especificamente os cromossomos X e Y. A FISH geralmente requer a ruptura dos órgãos reprodutivos para expor cromossomos mitóticos ou meióticos e permitir a coloração de regiões genômicas específicas com sondas fluorescentes. WFISH permite a preservação da estrutura citológica nativa do testículo, juntamente com um bom nível de detecção de sinal de sondas fluorescentes visando sequências repetitivas de DNA. Isso permite que os pesquisadores acompanhem as mudanças no comportamento cromossômico das células que passam pela meiose ao longo da estrutura do órgão, onde cada fase do processo pode ser claramente distinguida. Esta técnica poderia ser particularmente útil para estudar o pareamento meiótico cromossômico e investigar os fenótipos citológicos associados, por exemplo, a distorções sintéticas da razão sexual, a esterilidade masculina híbrida e o knock-out de genes envolvidos na espermatogênese.