Manutenção e avaliação de vários tipos de tecidos e células do olho usando um novo sistema fluídico sem bomba

Muitos modelos in vitro usados para investigar a função tecidual e a biologia celular requerem um fluxo de meios para fornecer oxigenação adequada e condições celulares ótimas necessárias para a manutenção da função e viabilidade. Para este fim, desenvolvemos um sistema de cultura de fluxo multicanal para manter tecidos e células em cultura e avaliar continuamente a função e viabilidade por sensores em linha e/ou coleta de frações de escoamento. O sistema combina detecção óptica contínua de 8 canais da taxa de consumo de oxigênio com um coletor de fração integrado para medir simultaneamente as taxas de produção de metabólitos e secreção de hormônios. Embora seja capaz de manter e avaliar uma ampla gama de modelos de tecidos e células, incluindo ilhotas, músculo e hipotálamo, aqui descrevemos seus princípios operacionais e as preparações/protocolos experimentais que usamos para investigar a regulação bioenergética da retina isolada de camundongos, epitélio pigmentado da retina de camundongos (EPR)-esclera coroide e células de EPR humanas cultivadas. Inovações no projeto do sistema, como o fluxo de fluido sem bomba, produziram uma operação muito simplificada de um sistema de fluxo multicanal. São mostrados vídeos e imagens que ilustram como montar, preparar o instrumento para um experimento e carregar os diferentes modelos tecido/célula nas câmaras de perifusão. Além disso, diretrizes para a seleção de condições para experimentos específicos de protocolos e tecidos são delineadas e discutidas, incluindo o estabelecimento da relação correta entre fluxo e tecido para obter condições de cultura consistentes e estáveis e determinações precisas das taxas de consumo e produção. A combinação de manutenção tecidual ideal e avaliação em tempo real de múltiplos parâmetros produz conjuntos de dados altamente informativos que terão grande utilidade para a pesquisa na fisiologia do olho e descoberta de drogas para o tratamento da visão prejudicada.