Mantenimiento y evaluación de varios tipos de tejidos y células del ojo mediante un novedoso sistema de fluídica sin bomba

Muchos modelos in vitro utilizados para investigar la función tisular y la biología celular requieren un flujo de medios para proporcionar una oxigenación adecuada y las condiciones celulares óptimas necesarias para el mantenimiento de la función y la viabilidad. Con este fin, hemos desarrollado un sistema de cultivo de flujo multicanal para mantener el tejido y las células en cultivo y evaluar continuamente la función y la viabilidad mediante sensores en línea y/o la recolección de fracciones de flujo de salida. El sistema combina la detección óptica continua de 8 canales de la tasa de consumo de oxígeno con un colector de fracciones incorporado para medir simultáneamente las tasas de producción de metabolitos y secreción de hormonas. Aunque es capaz de mantener y evaluar una amplia gama de modelos tisulares y celulares, incluidos los islotes, el músculo y el hipotálamo, aquí describimos sus principios operativos y las preparaciones/protocolos experimentales que hemos utilizado para investigar la regulación bioenergética de la retina aislada de ratón, el epitelio pigmentario de la retina de ratón (EPR), la esclerótica coroides y las células humanas cultivadas de EPR. Las innovaciones en el diseño del sistema, como el flujo de fluido sin bomba, han producido una operación muy simplificada de un sistema de flujo multicanal. Se muestran vídeos e imágenes que ilustran cómo ensamblar, preparar el instrumento para un experimento y cargar los diferentes modelos de tejido/célula en las cámaras de perifusión. Además, se delinean y discuten las pautas para seleccionar las condiciones para los experimentos específicos de protocolo y tejido, incluido el establecimiento de la relación correcta entre el caudal y el tejido para obtener condiciones de cultivo consistentes y estables y determinaciones precisas de las tasas de consumo y producción. La combinación del mantenimiento óptimo de los tejidos y la evaluación en tiempo real de múltiples parámetros produce conjuntos de datos altamente informativos que tendrán una gran utilidad para la investigación en la fisiología del ojo y el descubrimiento de fármacos para el tratamiento de la visión deficiente.