Поддержание и оценка различных типов тканей и клеток глаза с помощью новой системы Pumpless Fluidics

Многие модели in vitro , используемые для исследования функции тканей и клеточной биологии, требуют потока среды для обеспечения адекватной оксигенации и оптимальных клеточных условий, необходимых для поддержания функции и жизнеспособности. С этой целью мы разработали многоканальную систему проточной культуры для поддержания тканей и клеток в культуре и непрерывной оценки функции и жизнеспособности с помощью встроенных датчиков и/или сбора фракций утечки. Система сочетает в себе 8-канальное непрерывное оптическое измерение скорости потребления кислорода со встроенным коллектором фракций для одновременного измерения скорости выработки метаболитов и секреции гормонов. Несмотря на то, что он способен поддерживать и оценивать широкий спектр тканевых и клеточных моделей, включая островки, мышцы и гипоталамус, здесь мы опишем его принципы работы и экспериментальные препараты/протоколы, которые мы использовали для исследования биоэнергетической регуляции изолированной сетчатки мыши, пигментного эпителия сетчатки мыши (RPE)-хориоидной склеры и культивируемых клеток RPE человека. Инновации в конструкции системы, такие как безнасосный поток жидкости, значительно упростили работу многоканальной проточной системы. Показаны видеоролики и изображения, которые иллюстрируют, как собрать, подготовить инструмент к эксперименту и загрузить различные модели тканей/клеток в перифузионные камеры. Кроме того, излагаются и обсуждаются рекомендации по выбору условий для протокольных и тканеспецифичных экспериментов, включая установление правильного соотношения скорости потока к ткани для получения последовательных и стабильных условий культивирования и точного определения норм расхода и производства. Сочетание оптимального ухода за тканями и оценки нескольких параметров в режиме реального времени позволяет получить высокоинформативные наборы данных, которые будут иметь большое значение для исследований в области физиологии глаза и разработки лекарств для лечения нарушений зрения.