В этом исследовании разработан эффективный и воспроизводимый протокол Tuina для лечения замороженного плеча, установленный на модели крысы. Такой подход поможет изучить метод лечения замороженных плеч Туйна-терапией.
Синдром замороженного плечевого сустава (ФС) является распространенным заболеванием, для которого не определена оптимальная терапия. Туйна-терапия, техника традиционной китайской медицины (ТКМ), используемая для лечения пациентов с ФС в китайских больницах, продемонстрировала отличные результаты, но ее механизмы до конца не изучены. Основываясь на предыдущем исследовании, эта работа была направлена на разработку протокола Туина для модели крысы с ФС. Мы случайным образом разделили 20 крыс SD на контрольную (C; n = 5), FS модель (M; n = 5), FS модель лечения Tuina (MT; n = 5) и FS модель перорального лечения (MO; n = 5). В этом исследовании использовали метод гипсовой иммобилизации для создания модели крыс FS. Оценивали влияние туина и перорального дексаметазона на плечелопаточный диапазон движений (ROM) и оценивали гистологические данные. Наше исследование показало, что Туина и пероральный дексаметазон способны улучшить активный ROM плечевого сустава и сохранить структуру капсулы, при этом терапия Туина оказалась более эффективной, чем пероральный дексаметазон. В заключение следует отметить, что протокол Туины, установленный в данном исследовании, был высокоэффективным при ФС.
Замороженный плечевой сустав (ФС), также известный как адгезивный капсулит плеча, является самоизлечивающимся заболеванием, характеризующимся болью в плече и дефицитом подвижности. Обычно он поражает людей в возрасте от 30 до 70 лет, средний возраст которых составляет 50 лет, и имеет распространенность около 5%среди населения Китая. Сообщается, что у женщин частота ФС в 1,6 раза выше, чем умужчин2. Распространенность ФС выше у людей с сахарным диабетом, нарушениями углеводного и липидного обмена или другими сопутствующими заболеваниями и колеблется от 10% до 36%2,3. Современные клинические методы лечения ФС включают физиотерапию, стероидные препараты и хирургическое лечение4.
Было показано, что туина, терапия традиционной китайской медицины (ТКМ), эффективно облегчает боль в плече у пациентов с ФС, улучшая качество их жизни 5,6. Тем не менее, основные механизмы этого лечения недостаточно изучены. Таким образом, использование животных моделей для изучения эффектов и механизмов Tuina в лечении ФС имеет решающее значение.
Плечевой сустав крысы имеет сложную структуру, аналогичную строению плеча человека, и часто используется в механистических исследованиях FS7. Модель крыс FS характеризуется снижением плечевого сустава и фиброза капсулы8. Кроме того, эта модель позволяет наблюдать за капсулой плечевого сустава и проводить патологоанатомические исследования при восстановлении травмы9. Кроме того, пероральные кортикостероиды часто используются в качестве контрольной группы в исследованиях лечения ФС10. Данное исследование направлено на разработку протокола Tuina для модели крыс FS и демонстрирует возможность проведения экспериментов на животных в исследованиях Tuina путем сравнения эффективности терапии Tuina и перорального дексаметазона.
Это исследование было одобрено Комитетом по этике Аффилированной больницы Шаньдунского университета традиционной китайской медицины (номер: AWE-2022-023).
1. Подопытные животные
2. Метод группировки
3. Разработка модели ТЭО
4. Метод Туйна
ПРИМЕЧАНИЕ: На протяжении всей процедуры исследователь должен носить средства индивидуальной защиты. Все манипуляции должен выполнять только один профессиональный врач Туйна (рисунок 3, рисунок 4 и рисунок 5).
5. Измерение плечевого сустава
ПРИМЕЧАНИЕ: Важно завершить процесс измерения как можно быстрее, чтобы предотвратить дегенерацию ткани капсулы сустава.
6. Подготовка раздела
7. Окрашивание H&E
8. Окрашивание по Массону
Физическая активность крыс наблюдалась для оценки успешности или неудачи модели ФС. Предыдущее исследование показало, что гипсовая иммобилизация значительно снижала пройденное расстояние и скорость ходьбы по сравнению с нормальнымикрысами. Другое исследование показало, что ФС не влияет на пройденное расстояние, а хромота является наиболее распространенным симптомом13. Это исследование показало скованность в правом плечевом суставе, сокращение правой верхней конечности, мышечную атрофию и хромоту у крыс после моделирования. Эти поражения в группах МТ и МО полностью исчезли через 2 недели вмешательства. Но в группе М существенных изменений не произошло.
Основным критерием оценки эффективности Tuina при ФС является измерение плечевого сустава ROM18. Мы отметили, что средние значения плечелопаточного ПЗУ составляли 149,3° ± 5,9° в группе С, 111,1° ± 3,9° в группе М, 128,5° ± 2,8° в группе МТ и 119,56° ± 2,9° в группе МО. Как показано на рисунке 7, плечелопаточное ПЗУ крыс в группе М было достоверно ниже, чем в группе С (Р < 0,0001). При этом ПЗУ в группе МТ и группе МО был достоверно выше, чем в группе М (Р < 0,05, Р < 0,0001). Однако ПЗУ в группе МО было достоверно ниже, чем в группе МТ (P < 0,0001). Это открытие говорит о том, что Туйна может значительно улучшить функцию плечевого сустава у крыс с ФС.
Кроме того, окрашивание H&E и окрашивание по Массону могут дополнительно продемонстрировать эффекты Tuina в сохранении структуры и уменьшении фиброза в капсуле. Для облегчения наблюдения для гистологических находок использовали капсулу плечевого сустава. Капсула плечевого сустава состоит из синовиального и фиброзногослоев 19. При окрашивании H&E выявлена пролиферация синовиоцитов, уплощение синовиальных складок, стазис эритроцитов и сосудистая пролиферация в группе М, что является типичными признаками ФС (рис. 8А, Б). Эти признаки в некоторой степени уменьшились после терапии препаратом Туина и пероральным дексаметазоном (рис. 8C, D). По сравнению с группой МТ, группа МО также показала большое количество синовиальных клеток. Окрашивание по Массону показало расположение пучков волокон в каждой группе (желтые стрелки). Капсула состоит из рыхлой сети ретикулярных волокон с пучками волокон, расположенными в аккуратном направлении (рис. 8E). В группе М пучки волокон располагались беспорядочно, что указывает на фиброз капсулы (рис. 8F). Капсулы крыс в группе МТ показали, что пучки волокон аккуратно и четко расслоены, но остаются слегка неупорядоченными в группе МО (рис. 8G, H).
Рисунок 1: Протокол создания модели ФС и вмешательства Туины. Крысы получали адаптивное питание в течение 7 дней, установление модели ФС в течение 21 дня, а терапию Туина проводили ежедневно в течение 14 дней. На 36-й день все крысы были принесены в жертву. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 2: Гипсовая иммобилизация для создания модели ФС на крысе. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 3: Количественный контроль манипуляции . (A) Интеллектуальная система определения параметров техники массажа. (B) Три силы могут быть измерены: параллельная сила вдоль направления X, продольная сила вдоль направления Y и вертикальная сила вдоль направления Z. (В) Прочность ротационно-месильного метода. Красная кривая представляет стабилизированную вертикальную силу (0,5 кг). Оранжевая кривая представляет собой регулярную параллельную силу. Белая кривая представляет собой регулярную продольную силу. (D) Сила метода точечного прессования. Красная кривая представляет вертикальную силу (0,5 кг). Оранжевые и белые кривые представляют непараллельные и продольные силы. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 4: Манипуляция, используемая в терапии Туйна. (А-С) Разомните мышцы правых плеч, передних конечностей и спины. (Д-Г) Точечный пресс LI15, SI11, HT01 и LI11. (Х-К) Растягивайте переднюю конечность в положениях приведения, отведения, переднего разгибания и заднего разгибания. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 5: Анатомическое положение LI15, SI11, HT01 и LI11 у крыс. ● Латеральная поверхность, ○ Медиальная поверхность. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 6: Измерение плечевого сустава. Тонкая нить прикрепляется к инъекционной игле, введенной в плечевой стержень, и тянется за другой конец с усилием 5 g, чтобы сделать его параллельным плечевому стержню. Угол между нижним краем лопатки и плечевой костью, измеряется как плечевая кость. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы просмотреть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 7: Плечелопаточный ROM в трех группах крыс. Значения являются средними ± S.D., n = 5. На значимые различия указывает односторонний ANOVA (a P < 0,001 и bP < 0,0001). Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Рисунок 8: Гистологические данные капсулы плечевого сустава. (А,Д) Контрольная группа содержит нормальную капсульную структуру (окрашивание H&E и Masson). (Б,Ж) Модельная группа FS иллюстрирует следующие изменения в структуре капсулы: уплощенные синовиальные складки, фиброз капсулы и нарушенные пучки волокон (окрашивание H&E и Masson). (С,Г). Модель FS в сочетании с группой Tuina иллюстрирует, что структура капсулы близка к нормальной, а фиброз не очевиден (окрашивание H&E и Masson). (Г,Н) Модель ФС в сочетании с пероральным дексаметазоном показывает, что структура капсулы близка к нормальной, а фиброз очевиден (окрашивание H&E и Masson). Масштабная линейка = 100 мкм. HH: головка плечевой кости; черная стрелка: синовиальные складки; красная стрелка: застой эритроцитов и пролиферация сосудов; Желтая стрелка: пучки волокон. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы увидеть увеличенную версию этого рисунка.
Первым важным шагом является выбор модели. Из-за сложности реализации первичной модели ФС для установлениямоделей ФС крыс часто используют гипсовую иммобилизацию и хирургическую внутреннюю фиксацию. Наиболее выраженное ограничение подвижности плечевого сустава и фиброз капсулы наблюдались в модели ФС, установленной гипсовой иммобилизацией в течение 3 недель12,20. В этом исследовании показатели успешности модели ФС были отличными, со 100% успехом.
Вторым критическим шагом являются манипуляции, используемые в этом протоколе. В данном исследовании использовались три манипуляции (разминание, надавливание и растяжение). Манипуляция разминания мягких тканей применялась к плечу, лопатке и предплечью, чтобы расслабить мышцы. Манипуляции с надавливанием выполнялись путем надавливания на акупунктурные точки, такие как LI15, SI11, HT01 и LI11, которые чаще всего используются в клинической практике при ФС 5,21. LI15, SI11 и HT01 расположены в положениях вокруг капсулы плечевого сустава и могут быть эффективны для улучшения функции ROM и плечевого сустава22. LI11 часто используется при двигательных нарушениях верхних конечностей и располагается в том же меридиане, что и LI15. Этот метод сопоставления акупунктурных точек помогает повысить эффективность LI1523. После полного расслабления были использованы техники растяжки для восстановления функциональной активности.
Возможная проблема в этом протоколе заключается в том, что крысы проявляют интенсивную резистентность во время Tuina, что может быть вызвано страхом, а не превышением толерантности крыс. В этот момент манипуляции следует прекратить до тех пор, пока крысы не успокоятся (поглаживание в течение 10 с успокаивает крыс). Кроме того, степень растяжения должна быть скорректирована в соответствии с симптомами крыс. Изначально ограничение плечевого сустава было очевидным, а амплитуда растяжения была небольшой. Наряду с вмешательством функция плечевого сустава у крыс постепенно восстанавливалась, а амплитуда растяжения прогрессивно увеличивалась. Стандартом является то, что крысы могут принять метод растяжения без сопротивления. Наконец, крысы обладают определенной степенью агрессии, а туйна требует длительного контакта с крысами, поэтому важно носить средства индивидуальной защиты.
Количественный контроль манипуляций является наиболее сложным в экспериментах Туины. В то время как тренажер массажной манипуляции может быть использован для контроля силы и частоты одной манипуляции, этот метод ограничен, когда задействовано несколько манипуляций и участков лечения24,25. В клинической практике Туйна, как правило, выполняется непосредственно практикующими врачами, и в этом исследовании было трудно вмешаться с помощью медицинского оборудования. Для контроля стимуляции можно использовать интеллектуальную систему определения параметров техники массажа, чтобы стандартизировать тренировку Туйны. После тренировки исследователь может в какой-то степени применить одинаковую силу к каждой крысе. Основным ограничением этого протокола является то, что манипуляции нельзя полностью контролировать.
Терапия ТКМ Туйна имеет богатую историю использования по всему Китаю, при этом различные врачи в больницах используют различные комбинации манипуляций и мест лечения. Поэтому важно создать воспроизводимые и эффективные протоколы как для экспериментов на животных, так и для клинических исследований. В этом исследовании использованные манипуляции и акупунктурные точки были основаны на предыдущем исследовании нашей команды, объединяющем наш клинический опыт с характеристиками модели21 животного ФС. Данное исследование продемонстрировало эффективность разработанного протокола Tuina в улучшении функции плечевого сустава и уменьшении капсульного фиброза у крыс с ФС. Эти результаты обеспечивают основу для дальнейших исследований механизмов, лежащих в основе лечения Туйной. Кроме того, протокол может быть полезен для исследователей, заинтересованных в изучении эффективности альтернативных медицинских методов лечения ФС.
Предыдущее исследование показало, что механизм вмешательства Tuina в фиброз может быть связан с подавлением регуляции TGF-β и CTGF при одновременном регулировании баланса MMP-1/TIMP-1, тем самым облегчая выработку внеклеточного матрикса (ECM)26. Влияние Туйны на фиброз плечевой капсулы может быть достигнуто за счет регуляции различных механизмов. Тем не менее, необходимы дальнейшие исследования, чтобы полностью понять механизмы, участвующие в этом улучшении.
Эта работа была поддержана Планом развития науки и технологий на 2020 год в городе Цзинань (грант No 202019059), Научно-техническим проектом традиционной китайской медицины провинции Шаньдун (номер гранта 2021Q080) и Проектом наследования Школы традиционной китайской медицины Цилу (номер гранта [2022]93).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
4% paraformaldehyde | Solarbio | P1110 | |
Embedding machine | Changzhou Paisijie Medical Equipment Co., Ltd | BM450A | |
Ethylene Diamine Tetraacetic Acid (EDTA) | Solarbio | E1171 | |
Hematoxylin eosin (HE) staining kit | Sparkjade | EE0012 | |
Intelligent-massage technique parameter determination system | Shanghai Dukang Intrument Equipment Co. Ltd | ZTC- | |
Microtome | Leica | 531CM-Y43 | |
Modified Masson Trichrome Staining Solution | Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd | R20381-8 | Bouin 50 mL; lapis lazuli blue dye 50 mL; Hematoxylin (Mayer) 50 mL; acidic ethanol differentiation solution 50 mL; ponceau magenta dye solution 50 mL; phosphomolybdic acid solution 50 mL; aniline blue staining solution 50 mL; weak acid 50 mL |
Tribromoethanol | Macklin | T903147-5 |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved