Methoden voor elektroporatie en transformatie bevestiging in Limosilactobacillus reuteri DSM20016

Lactobacillus was een ongelooflijk groot, divers geslacht van bacteriën bestaande uit 261 soorten, waarvan er verschillende commensale stammen waren met het potentieel voor gebruik als een chassis voor synthetische biologische inspanningen in het maagdarmkanaal. De grote fenotypische en genotypische variatie die binnen het geslacht werd waargenomen, leidde tot een recente herclassificatie en de introductie van 23 nieuwe geslachten.

Vanwege de breedte van de variaties binnen de oude geslachten, werken protocollen die in één lid worden gedemonstreerd mogelijk niet zoals geadverteerd met andere leden. Een gebrek aan gecentraliseerde informatie over hoe specifieke stammen precies moeten worden gemanipuleerd, heeft geleid tot een reeks ad-hocbenaderingen , vaak aangepast van andere bacteriële families. Dit kan de zaken bemoeilijken voor onderzoekers die in het veld beginnen, die misschien niet weten welke informatie wel of niet van toepassing is op de door hen gekozen soort.

In dit artikel willen we een reeks protocollen centraliseren met aantoonbaar succes, met name in de Limosilactobacillus reuteri-stamaanduiding F275 (andere verzamelnummers: DSM20016, ATCC23272, CIP109823), samen met advies voor probleemoplossing en veelvoorkomende problemen die men kan tegenkomen. Deze protocollen moeten een onderzoeker met weinig tot geen ervaring met het werken met L. reuteri DSM20016 in staat stellen om een plasmide te transformeren, transformatie te bevestigen en systeemfeedback in een plaatlezer te meten via een reporter-eiwit.