Metoder för elektroporering och transformationsbekräftelse i Limosilactobacillus reuteri DSM20016

Lactobacillus var ett otroligt stort, varierat släkte av bakterier som omfattade 261 arter, varav flera var kommensala stammar med potential att användas som ett chassi för syntetiska biologiska strävanden inom mag-tarmkanalen. Den stora fenotypiska och genotypiska variationen som observerats inom släktet ledde till en ny omklassificering och införandet av 23 nya släkten.

På grund av bredden av variationer inom de gamla släktena kanske protokoll som visas i en medlem inte fungerar som annonserat med andra medlemmar. Brist på centraliserad information om hur man exakt manipulerar specifika stammar har lett till en rad ad hoc-metoder , ofta anpassade från andra bakteriefamiljer. Detta kan komplicera saker för forskare som börjar i fältet, som kanske inte vet vilken information som gäller eller inte gäller för deras valda stam.

I det här dokumentet strävar vi efter att centralisera en uppsättning protokoll med påvisad framgång, särskilt i Limosilactobacillus reuteri-stambeteckningen F275 (andra samlingsnummer: DSM20016, ATCC23272, CIP109823), tillsammans med felsökningsråd och vanliga problem som man kan stöta på. Dessa protokoll bör göra det möjligt för en forskare med liten eller ingen erfarenhet av att arbeta med L. reuteri DSM20016 att omvandla en plasmid, bekräfta transformation och mäta systemåterkoppling i en plattläsare via ett reporterprotein.