Großtechnische Zellproduktion auf Basis von auflösbaren porösen Mikroträgern in GMP-Qualität

Forscher in der Zell- und Gentherapie-Industrie (CGT) stehen seit langem vor einer gewaltigen Herausforderung bei der effizienten und großflächigen Vermehrung von Zellen. Um die primären Mängel des zweidimensionalen (2D) planaren Kultivierungssystems zu beheben, haben wir auf innovative Weise eine automatisierte Plattform für die geschlossene Zellproduktion im industriellen Maßstab (ACISCP) entwickelt, die auf einem GMP-tauglichen, auflösbaren und porösen Mikroträger für die 3D-Kultur adhärenter Zellen basiert, einschließlich humaner mesenchymaler Stamm-/Stromazellen (hMSCs), HEK293T Zellen und Vero-Zellen. Um eine großflächige Expansion zu erreichen, wurde eine zweistufige Expansion mit 5 L und 15 L Rührkessel-Bioreaktoren durchgeführt, um 1,1 x^{10 10} hMSCs mit einer insgesamt 128-fachen Expansion innerhalb von 9 Tagen zu erhalten. Die Zellen wurden geerntet, indem die Mikroträger vollständig aufgelöst wurden, konzentriert, gewaschen und mit einem auf einer kontinuierlichen Zentrifuge basierenden Zellverarbeitungssystem formuliert und dann mit einem Zellfüllsystem aliquotiert. Im Vergleich zu planaren 2D-Kulturen gibt es keine signifikanten Unterschiede in der Qualität von hMSCs, die aus 3D-Kulturen gewonnen werden. Wir haben diese auflösbaren porösen Mikroträger auch auf andere beliebte Zelltypen im CGT-Bereich angewendet; Insbesondere wurden HEK293T Zellen und Vero-Zellen zu Spitzenzelldichten von 1,68 x 10 7 Zellen/ml bzw. 1,08 x 10⁷ Zellen/ml kultiviert. Diese Studie liefert ein Protokoll für den Einsatz einer bioverfahrenstechnischen Plattform, die die Eigenschaften von auflösbaren Mikroträgern in GMP-Qualität und fortschrittlichen geschlossenen Geräten nutzt, um die Herstellung adhärenter Zellen im industriellen Maßstab zu erreichen.