עבודה זו נתמכה כספית על ידי הקרן הלאומית למדע לחוקרים צעירים מצטיינים (82125018).

חבל הטבור האנושי התקבל מבית החולים צינגהואה צ'אנג-גנג בבייג'ינג. כל ההליכים והפרוטוקולים הנוגעים לרכישה, בידוד ותרבית של תאי גזע מזנכימליים מזנכימליים מחבל הטבור האנושיים (UCMSCs) נערכו בהסכמה מדעת ובאישור ועדת האתיקה של בית החולים צינגהואה צ'אנג-גנג בבייג'ינג (מספר הגשה 22035-4-02), והנהלים והפרו...

ייצור מערכת סגורה של תאים דבקים המבוססים על מיקרו-נשאים נמסים

<ol>
	<li>Golchin, A., Farahany, T. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Biological+products:+Cellular+therapy+and+FDA+approved+products.">Biological products: Cellular therapy and FDA approved products.</a> Stem Cell Reviews and Reports. 15 (2), 166-175 (2019).</li><li>Young, C. M., Quinn, C., Trusheim, M. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Durable+cell+and+gene+therapy+potential+patient+and+financial+impact:+US+projections+of+product+approvals,+patients+treated,+and+product+revenues.">Durable cell and gene therapy potential patient and financial impact: US projections of product approvals, patients treated, and product revenues.</a> Drug Discovery Today. 27 (1), 17-30 (2022).</li><li>Elverum, K., Whitman, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Delivering+cellular+and+gene+therapies+to+patients:+solutions+for+realizing+the+potential+of+the+next+generation+of+medicine.">Delivering cellular and gene therapies to patients: solutions for realizing the potential of the next generation of medicine.</a> Gene Therapy. 27 (12), 537-544 (2020).</li><li>Blache, U., Popp, G., D&#252;nkel, A., Koehl, U., Fricke, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Potential+solutions+for+manufacture+of+CAR+T+cells+in+cancer+immunotherapy.">Potential solutions for manufacture of CAR T cells in cancer immunotherapy.</a> Nature Communications. 13 (1), 5225 (2022).</li><li>Lee, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cell+culture+process+scale-up+challenges+for+commercial-scale+manufacturing+of+allogeneic+pluripotent+stem+cell+products.">Cell culture process scale-up challenges for commercial-scale manufacturing of allogeneic pluripotent stem cell products.</a> Bioengineering. 9 (3), 92 (2022).</li><li>Emerson, J., Glassey, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioprocess+monitoring+and+control:+Challenges+in+cell+and+gene+therapy.">Bioprocess monitoring and control: Challenges in cell and gene therapy.</a> Current Opinion in Chemical Engineering. 34, 100722 (2021).</li><li>Robb, K. P., Fitzgerald, J. C., Barry, F., Viswanathan, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Mesenchymal+stromal+cell+therapy:+progress+in+manufacturing+and+assessments+of+potency.">Mesenchymal stromal cell therapy: progress in manufacturing and assessments of potency.</a> Cytotherapy. 21 (3), 289-306 (2019).</li><li>Olsen, T. R., Ng, K. S., Lock, L. T., Ahsan, T., Rowley, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Peak+MSC-Are+we+there+yet.">Peak MSC-Are we there yet.</a> Frontiers in Medicine. 5, 178 (2018).</li><li>. Roots Analysis. Stem Cell Therapy Contract Manufacturing (CMO) Market, 2019 - 2030 Available from: <a target="_blank" href="https://www.rootsanalysis.com/reports/view_document/stem-cell-therapy-contract-manufacturing-market-2019-2030/271.html">https://www.rootsanalysis.com/reports/view_document/stem-cell-therapy-contract-manufacturing-market-2019-2030/271.html</a> (2019)</li><li>Elseberg, C. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Microcarrier-based+expansion+process+for+hMSCs+with+high+vitality+and+undifferentiated+characteristics.">Microcarrier-based expansion process for hMSCs with high vitality and undifferentiated characteristics.</a> The International Journal of Artificial Organs. 35 (2), 93-107 (2012).</li><li>de Soure, A. M., Fernandes-Platzgummer, A., Silva, d. a., L, C., Cabral, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scalable+microcarrier-based+manufacturing+of+mesenchymal+stem/stromal+cells.">Scalable microcarrier-based manufacturing of mesenchymal stem/stromal cells.</a> Journal of Biotechnology. 236, 88-109 (2016).</li><li>Rafiq, Q. A., Coopman, K., Nienow, A. W., Hewitt, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Systematic+microcarrier+screening+and+agitated+culture+conditions+improves+human+mesenchymal+stem+cell+yield+in+bioreactors.">Systematic microcarrier screening and agitated culture conditions improves human mesenchymal stem cell yield in bioreactors.</a> Biotechnology Journal. 11 (4), 473-486 (2016).</li><li>Tavassoli, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+production+of+stem+cells+utilizing+microcarriers:+A+biomaterials+engineering+perspective+from+academic+research+to+commercialized+products.">Large-scale production of stem cells utilizing microcarriers: A biomaterials engineering perspective from academic research to commercialized products.</a> Biomaterials. 181, 333-346 (2018).</li><li>Mizukami, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Technologies+for+large-scale+umbilical+cord-derived+MSC+expansion:+Experimental+performance+and+cost+of+goods+analysis.">Technologies for large-scale umbilical cord-derived MSC expansion: Experimental performance and cost of goods analysis.</a> Biochemical Engineering Journal. 135, 36-48 (2018).</li><li>Yan, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dispersible+and+dissolvable+porous+microcarrier+tablets+enable+efficient+large-scale+human+mesenchymal+stem+cell+expansion.">Dispersible and dissolvable porous microcarrier tablets enable efficient large-scale human mesenchymal stem cell expansion.</a> Tissue Engineering. Part C, Methods. 26 (5), 263-275 (2020).</li><li>Carletti, E., Motta, A., Migliaresi, C., Haycock, J. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scaffolds+for+tissue+engineering+and+3D+cell+culture.">Scaffolds for tissue engineering and 3D cell culture.</a> 3D Cell Culture: Methods and Protocols. , 17-39 (2011).</li><li>Loh, Q. L., Choong, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Three-dimensional+scaffolds+for+tissue+engineering+applications:+Role+of+porosity+and+pore+size.">Three-dimensional scaffolds for tissue engineering applications: Role of porosity and pore size.</a> Tissue Engineering. Part B Reviews. 19 (6), 485-502 (2013).</li><li>Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=GMP-grade+microcarrier+and+automated+closed+industrial+scale+cell+production+platform+for+culture+of+MSCs.">GMP-grade microcarrier and automated closed industrial scale cell production platform for culture of MSCs.</a> Journal of Tissue Engineering and Regenerative Medicine. 16 (10), 934-944 (2022).</li><li>NMPA. Pharmaceutical Excipient Registration Database: Microcarrier tablets for cells. Center for Drug Evaluation Available from: <a target="_blank" href="https://www.cde.org.cn/main/xxgk/listpage/ba7aed094c29ae314670a3563a716e">https://www.cde.org.cn/main/xxgk/listpage/ba7aed094c29ae314670a3563a716e</a> (2023)</li><li>List of Drug Master Files (DMFs). US Food and Drug Administration Available from: <a target="_blank" href="https://www.fda.gov/drug-mater-files-dmfs/list-drug-master-files-dmfs">https://www.fda.gov/drug-mater-files-dmfs/list-drug-master-files-dmfs</a> (2023)</li><li>Beeravolu, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+and+characterization+of+mesenchymal+stromal+cells+from+human+umbilical+cord+and+fetal+placenta.">Isolation and characterization of mesenchymal stromal cells from human umbilical cord and fetal placenta.</a> Journal of Visualized Experiments. (122), e55224 (2017).</li><li>Xie, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+quality+evaluation+system+establishment+of+mesenchymal+stromal+cells+for+cell-based+therapy+products.">The quality evaluation system establishment of mesenchymal stromal cells for cell-based therapy products.</a> Stem Cell Research &amp; Therapy. 11 (1), 176 (2020).</li><li>Maillot, C., Sion, C., De Isla, N., Toye, D., Olmos, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quality+by+design+to+define+critical+process+parameters+for+mesenchymal+stem+cell+expansion.">Quality by design to define critical process parameters for mesenchymal stem cell expansion.</a> Biotechnology Advances. 50, 107765 (2021).</li><li>Silva Couto, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+human+mesenchymal+stem/stromal+cells+(hMSCs)+in+bioreactors+using+microcarriers:+Lessons+learnt+and+what+the+future+holds.">Expansion of human mesenchymal stem/stromal cells (hMSCs) in bioreactors using microcarriers: Lessons learnt and what the future holds.</a> Biotechnology Advances. 45, 107636 (2020).</li><li>Chen, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Facile+bead-to-bead+cell-transfer+method+for+serial+subculture+and+large-scale+expansion+of+human+mesenchymal+stem+cells+in+bioreactors.">Facile bead-to-bead cell-transfer method for serial subculture and large-scale expansion of human mesenchymal stem cells in bioreactors.</a> Stem Cells Translational Medicine. 10 (9), 1329-1342 (2021).</li><li>Tsai, A. C., Pacak, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Bioprocessing+of+human+mesenchymal+stem+cells:+From+planar+culture+to+microcarrier-based+bioreactors.">Bioprocessing of human mesenchymal stem cells: From planar culture to microcarrier-based bioreactors.</a> Bioengineering. 8 (7), 96 (2021).</li><li>Hewitt, C. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expansion+of+human+mesenchymal+stem+cells+on+microcarriers.">Expansion of human mesenchymal stem cells on microcarriers.</a> Biotechnology Letters. 33 (11), 2325-2335 (2011).</li><li>Mawji, I., Roberts, E. L., Dang, T., Abraham, B., Kallos, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Challenges+and+opportunities+in+downstream+separation+processes+for+mesenchymal+stromal+cells+cultured+in+microcarrier-based+stirred+suspension+bioreactors.">Challenges and opportunities in downstream separation processes for mesenchymal stromal cells cultured in microcarrier-based stirred suspension bioreactors.</a> Biotechnology and Bioengineering. 119 (11), 3062-3078 (2022).</li><li>Schirmaier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Scale-up+of+adipose+tissue-derived+mesenchymal+stem+cell+production+in+stirred+single-use+bioreactors+under+low-serum+conditions.">Scale-up of adipose tissue-derived mesenchymal stem cell production in stirred single-use bioreactors under low-serum conditions.</a> Engineering in Life Sciences. 14 (3), 292-303 (2014).</li><li>Lawson, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Process+development+for+expansion+of+human+mesenchymal+stromal+cells+in+a+50L+single-use+stirred+tank+bioreactor.">Process development for expansion of human mesenchymal stromal cells in a 50L single-use stirred tank bioreactor.</a> Biochemical Engineering Journal. 120, 49-62 (2017).</li><li>Yang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Large-scale+microcarrier+culture+of+HEK293T+cells+and+Vero+cells+in+single-use+bioreactors.">Large-scale microcarrier culture of HEK293T cells and Vero cells in single-use bioreactors.</a> AMB Express. 9 (1), 70 (2019).</li><li>Fang, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+scalable+vaccinia+virus-based+vector+production+process+using+dissolvable+porous+microcarriers.">Development of scalable vaccinia virus-based vector production process using dissolvable porous microcarriers.</a> 25th Annual Meeting of the American Society of Gene &amp; Cell Therapy. Molecular Therapy. 30, 195-196 (2022).</li></ol>

הן אימונותרפיה והן טיפול בתאי גזע משתמשים בתאים חיים כתרופות; עם זאת, המוצרים הסופיים שלהם לא צריך להיות מטוהר או מעוקר באותו אופן כמו מולקולות קטנות או וירוסים. לכן, העיקרון של איכות על ידי עיצוב (QbD) צריך תמיד לזכור מיושם בפועל על תהליך ייצור כימי ובקרה (CMC) במהלך ייצור תאים23. מ?...

תעשיית CGT הייתה עדה להתרחבות אקספוננציאלית בשני העשורים האחרונים. האבולוציה של תרופות הדור הבא צפויה לטפל ולרפא מחלות עקשנות רבות1. מאז האישור הראשון של מנהל המזון והתרופות האמריקאי (FDA) למוצר CGT, Kymriah, בשנת 2017, המחקר והפיתוח הקשורים ל-CGT בעולם המשיכו לצמוח בקצב מהיר, כאשר ה-FDA ראה בקשות לתרופות ניסיוניות חדשות פעילות עבור CGT גדל ל-500 בשנת 20182. על פי התחזיות, מספר האישורים של מוצרי CGT יעמוד ככל הנראה על 54-74 בארה"ב עד שנת 20302.
בעוד הצמיחה המהירה במחקר ובחדשנות של CGT מרגשת, עדיין קיים פער טכנולוגי גדול בין מחקר מעבדה לייצור בקנה מידה תעשייתי שיכול לספק תרופות מבטיחות אלה כדי להגיע לחולים רבים ככל שיידרש בעלויות סבירות. התהליכים הנוכחיים שאומצו עבור ניסויים קליניים אלה הוקמו במעבדות לניסויים בקנה מידה קטן, ונדרשים מאמצים משמעותיים כדי לשפר ולחדש בייצור CGT3. ישנם סוגים רבים של מוצרי CGT, רובם מבוססים על תאים חיים, שיכולים להיות אלוגנים, אוטולוגיים, מהונדסים או טבעיים. תרופות חיות אלה מורכבות הרבה יותר מישויות מולקולריות קטנות או ביולוגיות, ולכן הופכות ייצור בקנה מידה גדול לאתגר משמעותי 4,5,6. בעבודה זו, אנו מדגימים פרוטוקול ייצור תאים בקנה מידה גדול עבור שלושה תאים תלויי עיגון המיושמים באופן נרחב ב- CGTs. אלה כוללים תאי גזע מזנכימליים אנושיים / סטרומה (hMSCs), אשר שימשו לטיפול מבוסס תאים, ותאי HEK293T ותאי ורו, שניהם משמשים לייצור וירוסים להנדסה גנטית של המוצר הטיפולי הסופי. תאים תלויי עיגון מגודלים בדרך כלל בתרבית על מערכות מישוריות, הדורשות עיבוד ידני. עם זאת, שיטות תרבות ידנית דורשות כמות משמעותית של עבודה והן נוטות לזיהום, אשר יכול לסכן את איכות המוצר הסופי. יתר על כן, אין בקרת תהליך בתוך השורה, מה שמוביל לשונות משמעותית באיכות בין אצוות7. אם ניקח את הטיפול בתאי גזע כדוגמה, עם צנרת מבטיחה של מעל 200 מועמדים לטיפול בתאי גזע, ההערכה היא כי 300 טריליון hMSCs יהיה צורך בשנה כדי לענות על הדרישות של יישומים קליניים8. לפיכך, הייצור בקנה מידה גדול של תאים טיפוליים הפך לתנאי מוקדם לביצוע התערבויות טיפוליות אלה עם ביקוש תאים כה גבוה9.
כדי למנוע את המכשולים של מערכות מישוריות, נעשו מאמצים בפיתוח תהליכי ייצור בקנה מידה גדול בביוריאקטורים של מיכלי ערבוב עם מיקרו-נשאים קונבנציונליים שאינם ניתנים לפירוק 10,11,12,13, אך אלה סובלים מהליכי הכנה מסובכים ומיעילות קצירת תאים נמוכה 14. לאחרונה, חידשנו מיקרו-נשא נמס להרחבת תאי גזע, במטרה לעקוף את האתגרים של קצירת תאים ממיקרו-נשאים מסחריים קונבנציונליים שאינם נמסים15. 3D TableTrix זה, מיקרו-נשא נקבובי תלת-ממדי נמס בתקן GMP (תנאי ייצור נאותים), הראה פוטנציאל גדול לייצור תאים בקנה מידה גדול. ואכן, תרבית תלת-ממדית המבוססת על מיקרו-נשאים נקבוביים אלה עשויה ליצור מחדש מיקרו-סביבות ביומימטיות חיוביות כדי לקדם הידבקות, התפשטות, נדידה והפעלה של תאים16. המבנים הנקבוביים ורשתות הנקבוביות המחוברות זו לזו של מיקרו-נשאים יכולים ליצור שטח היצמדות תאים גדול יותר ולקדם את חילופי החמצן, חומרי המזון והמטבוליטים, ובכך ליצור מצע אופטימלי להתרחבות תאי מבחנה 17. הנקבוביות הגבוהה של מיקרו-נשאים נקבוביים תלת-ממדיים מומסים אלה בתקן GMP מאפשרת הרחבה בקנה מידה גדול של hMSCs, והיכולת של התאים להיות מומסים במלואם מאפשרת קציר יעיל של תאים מורחבים אלה18. זהו גם מוצר בדירוג GMP (תנאי ייצור נאותים) והוא נרשם כמוצר פרמצבטי במרכז הסיני להערכת תרופות (מספרי הגשה: F20210000003 ו-F20200000496)19 וב-FDA של ארה"ב (FDA, ארה"ב; מספר תיק מאסטר לסמים: 35481)20.
כאן, אנו מדגימים מערכת אוטומטית לייצור תאים בקנה מידה תעשייתי סגור (ACISCP)18 באמצעות מיקרו-נשאים נקבוביים אלה הניתנים לפיזור ולמסה עבור hMSC, תא HEK293T והרחבת תאי Vera. השגנו הרחבה דו-שכבתית מוצלחת של hMSCs (הרחבה של פי 128 במצטבר תוך 9 ימים) מביוריאקטור של 5 ליטר לביוריאקטור של 15 ליטר ולבסוף השגנו עד 1.1 x10 10 hMSCs מאצווה אחת של ייצור. התאים נקצרו על ידי המסה מוחלטת של המיקרו-נשאים, רוכזו, נשטפו ונוסחו באמצעות מערכת עיבוד תאים מבוססת צנטריפוגות בזרימה רציפה, ולאחר מכן הותאמו למערכת מילוי תאים. יתר על כן, הערכנו את האיכות של מוצרי hMSC כדי לאשר תאימות. הדגמנו גם את היישום של מיקרו-נשאים נמסים אלה לייצור מורחב של שני סוגים אחרים של תאי עיגון, תאי HEK293T ותאי ורו, המיושמים באופן נרחב בתעשיית ה-CGT. צפיפות השיא של תאי HEK293T הגיעה ל 1.68 x 10 7 תאים / מ"ל, ואילו צפיפות השיא של תאי Vero הגיעה ל 1.08 x 107 תאים / מ"ל. מערכת ACISCP יכולה להיות מותאמת לתרבית של מגוון תאים דבקים, והיא עשויה להפוך לפלטפורמה רבת עוצמה שתתרום לזירוז התיעוש של CGT.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr >
			<td >0.25% trypsin EDTA</td>
			<td >BasalMedia</td>
			<td >S310JV</td>
			<td >Used for 2D cell harvest.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix Digest</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >R001-500</td>
			<td >This is a reagent that specifically dissolves 3D TableTrix microcarriers.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix MSC Serum Free Medium</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >RMZ112</td>
			<td >This is a serum-free,animal-free medium for mesenchymal stem cell expansion and maintenance in 2D planar culture as well as 3D culture on 3D TableTrix microcarriers.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix Single-Use Filtration Module</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >R020-00-10</td>
			<td >This module contains 0.22 &#956;m capsule filters used for filtration of culture medium and digest solution.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix Single-Use Storage Bag (10 L)</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >R020-00-03</td>
			<td >Used as feed bag for 5 L bioreactor.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix Single-Use Storage Bag (3 L)</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >R020-00-01</td>
			<td >Used as cell seeding or transfer bags.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix Single-Use Storage Bag (50 L)</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >R020-00-04</td>
			<td >Used as feed bag for 15 L bioreactor.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix vivaPACK Disposable Fill&#38;Finish Consumable Kit</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >PACK-01-01</td>
			<td >This is a standard kit adapted to 3D vivaPACK fill and finish system.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix vivaPACK fill and finish system for cells</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >vivaPACK</td>
			<td >This system is a closed liquid handling device, with automated mixing and gas exhausting functions. Cells resuspended in cryopreservation buffer can be rapidly and evenly aliquoted into 20 bags per batch.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix vivaPREP PLUS cell processing system</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >vivaPREP PLUS</td>
			<td >This system is a continuous flow centrifuge-based device.Cells can be concentrated, washed, and resuspended under completely closed procedures.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix vivaPREP PLUS Disposable Cell Processing Kit</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >PREP-PLUS-00</td>
			<td >This is a standard kit adapted to 3D vivaPREP PLUS cell processing.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix vivaSPIN&#160; bioreactor 15 L</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >FTVS15</td>
			<td >This bioreactor product employs a controller, a 15 L glass stirred-tank vessel, and assessories. A special perfusion tube is available.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix vivaSPIN&#160; bioreactor 5 L</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >FTVS05</td>
			<td >This bioreactor product employs a controller, a 5 L glass stirred-tank vessel, and assessories.A special perfusion tube is available.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix vivaSPIN Closed System Consumable Pack (10/15 L)</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >R020-10-10</td>
			<td >This is a standard tubing kit adapted to 3D vivaSPIN bioreactor 15 L, containing sampling bags.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D FloTrix vivaSPIN Closed System Consumable Pack (2/5 L)</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >R020-05-10</td>
			<td >This is a standard tubing kit adapted to 3D vivaSPIN bioreactor 5 L, containing sampling bags.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D TableTrix microcarriers G02</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >G02-10-10g</td>
			<td >These porous and degradable microcarriers are suitable for HEK293T cell culture. They come pre-sterilized in 10g/bottle with C-Flex tubings for welding to tubes on bioreactors.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D TableTrix microcarriers V01</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >V01-100-10g</td>
			<td >These porous and degradable microcarriers are suitable for adherent cell culture, they come as non-sterilized microcarriers that need to be autoclaved in PBS before use. They are especially suitable for vaccine production.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >3D TableTrix microcarriers W01</td>
			<td >CytoNiche Biotech</td>
			<td >W01-10-10g (single-use packaging); 
			W01-200 (tablets)</td>
			<td >These porous and degradable microcarriers are suitable for adherent cell culture, especially for cells that need to be harvested as end products. They come pre-sterilized in 10g/bottle with C-Flex tubings for welding to tubes on bioreactors.The product has obtained 2 qualifications for pharmaceutical excipients from CDE, with the registration numbers of [F20200000496; F20210000003]. It has also received DMF qualification for pharmaceutical excipients from FDA, with the registration number of [DMF:35481]</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >APC anti-human CD45 Antibody</td>
			<td >BioLegend</td>
			<td >368512</td>
			<td >Used in flow cytometry for MSC identity assessment</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Calcein-AM/PI Double Staining Kit</td>
			<td >Dojindo</td>
			<td >C542</td>
			<td >Calcein-AM/PI Double Staining Kit is utilized for simultaneous fluorescence staining of viable and dead cells. This kit contains Calcein-AM and Propidium Iodide (PI) solutions, which stain viable and dead cells, respectively.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Cap for EZ Top Container Closures for NALGENE-containers (500mL)</td>
			<td >Saint-Gobain</td>
			<td>CAP-38</td>
			<td >Brands and catalogue numbers are only for example, similar products are available from various suppliers and as long as they have the same functionality, items could be substituted with other brands.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >C-Flex Tubing, Formulation 374 (0.25 in x 0.44 in)</td>
			<td >Saint-Gobain</td>
			<td >374-250-3</td>
			<td >Used for tube welding and disconnection.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >CryoMACS Freezing Bag 50</td>
			<td >Miltenyi Biotec&#160;</td>
			<td >200-074-400</td>
			<td >Used for expanding the 3D FloTrix vivaPACK Disposable Fill&#38;Finish Consumable Kit.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dimethyl Sulfate (DMSO)&#160;</td>
			<td >Sigma</td>
			<td >D2650-100mL</td>
			<td >Used for preparation of cryopreservation solution.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Dulbecco&#39;s Modified Eagle Medium (DMEM)</td>
			<td >BasalMedia</td>
			<td >L120KJ</td>
			<td >Used for cultivation of HEK293T and Vero cells.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DURAN Original GL 45 Laboratory bottle (2 L)</td>
			<td >DWK life sciences</td>
			<td >218016357</td>
			<td >Used for waste collection from the 5 L bioreactor.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DURAN Original GL 45 Laboratory bottle (5 L)</td>
			<td >DWK life sciences</td>
			<td >218017353</td>
			<td >Used for waste collection from the 15 L bioreactor.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >DURAN Original GL 45 Laboratory bottle (500 mL)</td>
			<td >DWK life sciences</td>
			<td >218014459</td>
			<td >Used for supplementary bottle of 0.1 M NaOH.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >EZ Top Container Closures for NALGENE-containers (500mL)</td>
			<td >Saint-Gobain</td>
			<td>EZ500 ML-38-2</td>
			<td >Brands and catalogue numbers are only for example, similar products are available from various suppliers and as long as they have the same functionality, items could be substituted with other brands.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fetal bovine serum (FBS) superior quality</td>
			<td >Wisent</td>
			<td >086-150</td>
			<td >Used for cultivation of HEK293T cells.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >FITC anti-human CD14 Antibody</td>
			<td >BioLegend</td>
			<td >301804</td>
			<td >Used in flow cytometry for MSC identity assessment.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >FITC anti-human CD34 Antibody</td>
			<td >BioLegend</td>
			<td >343504</td>
			<td >Used in flow cytometry for MSC identity assessment.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >FITC anti-human CD90 (Thy1) Antibody</td>
			<td >BioLegend</td>
			<td >328108</td>
			<td >Used in flow cytometry for MSC identity assessment.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Flow cytometry</td>
			<td >Beckman Coulter</td>
			<td >CytoFLEX</td>
			<td >Used for cell identity assessment.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Fluorescence Cell Analyzer</td>
			<td >Alit life science</td>
			<td >Countstar Rigel S2</td>
			<td >Used for cell counting. Cell viability can be calculated by staining with AO/PI dyes.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >GL 45 Multiport Connector Screw Cap with 2 ports&#160;</td>
			<td >DWK life sciences</td>
			<td >292632806</td>
			<td >Brands and catalogue numbers are only for example, similar products are available from various suppliers and as long as they have the same functionality, items could be substituted with other brands.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Glucose Meter</td>
			<td >Sinocare</td>
			<td >6243578</td>
			<td >Used for detecting glucose concentration in cell culture medium and supernatant.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Hank&#39;s Balanced Salt Solution (HBSS), with calcium and magnesium</td>
			<td >Gibco</td>
			<td >14025092</td>
			<td >Used for preparation of digest solution.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Human Albumin 20% Behring (HSA)</td>
			<td >CSL Behring</td>
			<td >N/A</td>
			<td >Used for preparation of wash buffer.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Inverted fluorescent microscope</td>
			<td >OLYMBUS</td>
			<td >CKX53SF</td>
			<td >Used for brifgt field and fluorescent observation and imaging.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Nalgene Measuring Cylinder (500 mL)</td>
			<td >Thermo Scientific</td>
			<td >3662-0500PK</td>
			<td >Used for calibrating the liquid handling volume speed of peristaltic pumps.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Newborn calf serum (NBS) superfine</td>
			<td >MINHAI BIO</td>
			<td >SC101.02</td>
			<td >Used for cultivation of Vero cells.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >OriCell human mesenchymal stem cell adipogenic differentiation and characterization kit</td>
			<td >Cyagen</td>
			<td >HUXUC-90031</td>
			<td >Used for tri-lineage differentiation of hUCMSCs.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >OriCell human mesenchymal stem cell chondrogenic differentiation and characterization kit</td>
			<td >Cyagen</td>
			<td >HUXUC-90041</td>
			<td >Used for tri-lineage differentiation of hUCMSCs.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >OriCell human mesenchymal stem cell osteogenic differentiation and characterization kit</td>
			<td >Cyagen</td>
			<td >HUXUC-90021</td>
			<td >Used for tri-lineage differentiation of hUCMSCs.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PE anti-human CD105 Antibody</td>
			<td >BioLegend</td>
			<td >800504</td>
			<td >Used in flow cytometry for MSC identity assessment.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PE anti-human CD19 Antibody</td>
			<td >BioLegend</td>
			<td >302208</td>
			<td >Used in flow cytometry for MSC identity assessment.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PE anti-human CD73 (Ecto-5&#39;-nucleotidase) Antibody</td>
			<td >BioLegend</td>
			<td >344004</td>
			<td >Used in flow cytometry for MSC identity assessment.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >PE anti-human HLA-DR Antibody</td>
			<td >BioLegend</td>
			<td >307605</td>
			<td >Used in flow cytometry for MSC identity assessment.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Phosphate Buffered Saline (PBS)</td>
			<td >Wisent</td>
			<td >311-010-CL</td>
			<td >Used in autoclaving of glass vessel and V01 microcarriers, and replacement of culture medium.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sani-Tech Platinum Cured Sanitary Silicone Tubing (0.13 in x 0.25 in)</td>
			<td >Saint-Gobain</td>
			<td >ULTRA-C-125-2F</td>
			<td >Used for solution transfering driven by peristaltic pumps.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Sterile Saline</td>
			<td >Hopebiol</td>
			<td >HBPP008-500</td>
			<td >Used for preparation of wash buffer.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Trypzyme Recombinant Trypsin</td>
			<td >BasalMedia</td>
			<td >S342JV</td>
			<td >This reagent is used for bead-to-bead transfer of HEK293T and Vero cells.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tube Sealer</td>
			<td >Yingqi Biotech</td>
			<td >Tube Sealer I</td>
			<td >This sealer is compatible with both C-Flex tubing and PVC tubing.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tube Welder for PVC tubing</td>
			<td >Chu Biotech</td>
			<td >Tube Welder Micro I</td>
			<td >Used for welding of PVC tubing.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >Tube Welder for TPE tubing</td>
			<td >Yingqi Biotech</td>
			<td >Tube Welder I-V2</td>
			<td >Used for welding of TPE tubing.</td>
		</tr>
		<tr >
			<td >ViaStain AO / PI Viability Stains</td>
			<td >Nexcelom</td>
			<td >CS2-0106-25mL</td>
			<td >Dual-Fluorescence Viability, using acridine orange (AO) and propidium iodide (PI), is the recommended method for accurate viability analysis of primary cells, such as PBMCs, and stem cells in samples containing debris.</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

large-scale cell production based on gmp-grade dissolvable porous microcarriers

חוקרים בתעשיית התרפיה התאית והגנטית (CGT) מתמודדים זה זמן רב עם אתגר עצום בהתרחבות יעילה ובקנה מידה גדול של תאים. כדי להתמודד עם החסרונות העיקריים של מערכת הטיפוח המישורית הדו-ממדית (2D), פיתחנו באופן חדשני פלטפורמה אוטומטית לייצור תאים בקנה מידה תעשייתי סגור (ACISCP) המבוססת על מיקרו-נשא בדרגה GMP, נמס ונקבובי עבור תרבית תלת-ממדית של תאים דבקים, כולל תאי גזע/סטרומה מזנכימליים אנושיים (hMSCs), תאי HEK293T ותאי ורו. כדי להשיג הרחבה בקנה מידה גדול, בוצעה הרחבה דו-שלבית עם ביוריאקטורים של 5 ליטר ו-15 ליטר עם מיכלי ערבוב כדי להניב 1.1 x10 10 hMSCs עם הרחבה כוללת של פי 128 תוך 9 ימים. התאים נקצרו על ידי המסה מוחלטת של המיקרו-נשאים, רוכזו, נשטפו ונוסחו באמצעות מערכת עיבוד תאים מבוססת צנטריפוגות בזרימה רציפה, ולאחר מכן הותאמו למערכת מילוי תאים. בהשוואה לתרבית מישורית דו-ממדית, אין הבדלים משמעותיים באיכות של hMSCs שנקטפו מתרבית תלת-ממדית. יישמנו גם מיקרו-נשאים נקבוביים נמסים אלה על סוגי תאים פופולריים אחרים במגזר CGT; באופן ספציפי, תאי HEK293T ותאי Vero טופחו לשיא צפיפות תאים של 1.68 x 10 7 תאים / מ"ל ו 1.08 x 107 תאים / מ"ל, בהתאמה. מחקר זה מספק פרוטוקול לשימוש בפלטפורמה של הנדסת תהליכים ביולוגיים הרותמת את המאפיינים של מיקרו-נשאים מתמוססים ברמת GMP וציוד סגור מתקדם להשגת ייצור בקנה מידה תעשייתי של תאים דבקים.

The CGT industry has witnessed an exponential expansion over the past two decades. The evolution of next-generation medicines is anticipated to treat and cure numerous refractory diseases1. Since the first Food and Drug Administration (FDA) approval of a CGT product, Kymriah, in 2017, CGT-related research and development in the world has continued to grow at a fast rate, with the FDA seeing active investigational new drug applications for CGT increased to 500 in 20182. It had been predicted that the number of approvals of CGT products will likely be 54-74 in the United States by 20302.
While the rapid growth in CGT research and innovation is exciting, there is still a large technological gap between lab research and industrial-scale manufacturing that could deliver these promising medicines to reach as many patients as needed at affordable costs. The current processes adopted for these clinical trials were established in labs for small-scale experiments, and significant efforts are needed to improve and innovate on CGT manufacturing3. There are many types of CGT products, most of them based on live cells, which can be allogenic, autologous, engineered, or natural. These living drugs are much more complex than small molecular entities or biologics, hence making large-scale manufacturing a significant challenge4,5,6. In this work, we demonstrate a large-scale cell production protocol for three anchorage-dependent cells that are widely applied in CGTs. These include human mesenchymal stem/stromal cells (hMSCs), which have been used for cell-based therapy, and HEK293T cells and Vero cells, both of which are used to produce viruses for the genetic engineering of the final therapeutic cell product. Anchorage-dependent cells are commonly cultured on planar systems, which require manual processing. However, manual culture methods require a significant amount of labor and are prone to contamination, which can compromise the quality of the end product. Furthermore, there is no in-line process control, leading to substantial variability in quality between batches7. Taking stem cell therapy as an example, with a promising pipeline of over 200 stem-cell therapy candidates, it is estimated that 300 trillion hMSCs would be needed per year to meet the demands of clinical applications8. Hence, the large-scale manufacturing of therapeutic cells has become a prerequisite to perform these therapeutic interventions with such a high cell demand9.
To preclude the setbacks of planar systems, efforts have been made in developing large-scale manufacturing processes in stirred-tank bioreactors with conventional non-dissolvable microcarriers10,11,12,13, but these suffer from complicated preparation procedures and low cell-harvesting efficiency14. Recently, we have innovated a dissolvable microcarrier for stem cell expansion, aiming to circumvent the challenges of cell harvesting from conventional non-dissolvable commercial microcarriers15. This novel, commercially available GMP-grade 3D dissolvable porous microcarrier, 3D TableTrix, has shown great potential for large-scale cell production. Indeed, 3D culture based on these porous microcarriers could potentially recreate favorable biomimetic microenvironments to promote cell adhesion, proliferation, migration, and activation16. The porous structures and interconnected pore networks of microcarriers could create a larger cell adhesion area and promote the exchange of oxygen, nutrients, and metabolites, thus creating an optimal substrate for in vitro cell expansion17. The high porosity of these GMP-grade 3D dissolvable porous microcarriers enables large-scale expansion of hMSCs, and the ability for the cells to be fully dissolved allows for the efficient harvesting of these expanded cells18. It is also a GMP-grade product and has been registered as a pharmaceutical excipient with the Chinese Center for Drug Evaluation (filing numbers: F20210000003 and F20200000496)19 and the FDA of the United States (FDA, USA; Drug Master File number: 35481)20.
Here, we illustrate an automated closed industrial scale cell production (ACISCP) system18 using these dispersible and dissolvable porous microcarriers for hMSC, HEK293T cell, and Vero cell expansion. We achieved a successful two-tiered expansion of hMSCs (128 cumulative fold expansion in 9 days) from a 5 L bioreactor to a 15 L bioreactor and finally obtained up to 1.1 x 1010 hMSCs from a single batch of production. The cells were harvested by completely dissolving the microcarriers, concentrated, washed and formulated with a continuous flow centrifuge-based cell processing system, and then aliquoted with a cell filling system. Furthermore, we assessed the quality of hMSC products to confirm compliance. We also demonstrated the application of these dissolvable microcarriers for the scaled-up production of two other types of anchorage cells, HEK293T cells and Vero cells, that are extensively applied in the CGT industry. The peak cell density of HEK293T cells reached 1.68 x 107 cells/mL, whereas the peak density of Vero cells reached 1.08 x 107 cells/mL. The ACISCP system could be adapted to culture a variety of adherent cells, and it could potentially become a powerful platform contributing to expediting the industrialization of CGT.

מחבר זרקור: קידום ייצור תרפיה תאית עם מיקרו-נשאים נמסים 

ייצור תאים בקנה מידה גדול המבוסס על מיקרו-נשאים נקבוביים נמסים ברמת GMP (תנאי ייצור נאותים)

The cell and gene therapy industry has witnessed an exponential expansion over the past two decades. However, a large technological gap exists between lab research and industrial skill manufacturing. Compliant with regulatory policies, and to meet the green demands of the CGT industry, automated closed systems have been adopted to produce cell therapeutics.For adherent cells, cultivation using microcarriers in scalable stirred-tank bioreactors, is a promising method. Conventionally, commercialized microcarriers are non-desirable. Cell harvesting using trypsinization and the saving out microcarriers by size is not only inefficient and challenging, but also impacts cell quality and causes safety concerns.In this study, we have successfully achieved large-scale cell production based on GMP-grade 3D TableTrix dissolvable microcarriers in an automated and closed system. Over 11 billion human mesenchymal stem cells were yield in a two-stage expansion within nine days. We also demonstrated high density culture of HEK293T cells and Vero cells, in which both densities reached above 10 million cells per milliliter.This advanced biomanufacturing platform allows adherence cells to be effectively expanded and completely harvested in an automated and closed manner. Our protocol offers an opportunity to enhance production efficiency and refine quality control at industrial-scale manufacturing of CGT products.

פלטפורמת ACISCP היא מערכת סגורה לחלוטין שמשתמשת בסדרה של ביוריאקטורים מוקפצים להרחבת קנה מידה, מערכת עיבוד תאים לקצירת תאים וניסוח אוטומטיים, ומערכת מילוי תאים (איור 1). תאים דבקים נצמדים למיקרו-נשאים הנקבוביים, אשר יכולים להתפזר לתוך הביוריאקטור, ובכך להשיג את הטיפוח המושעה ...

Watch this Scientific Journal Video about Advancing Cell Therapy Manufacturing with Dissolvable Microcarriers at JoVE.com

כאן, אנו מציגים פרוטוקול להשגת ייצור בקנה מידה גדול של תאים דבקים באמצעות מערכת סגורה לחלוטין המבוססת על מיקרו-נשאים נמסים ברמת GMP. הטיפוח של תאי גזע מזנכימליים אנושיים, תאי HEK293T ותאי ורו אומת ועמד הן בדרישות הכמות והן בקריטריוני האיכות של תעשיית התרפיה התאית והגנטית.

Researchers in the cell and gene therapy (CGT) industry have long faced a formidable challenge in the efficient and large-scale expansion of cells. To ...

תעשיית התרפיה התאית והגנטית הייתה עדה להתרחבות אקספוננציאלית בשני העשורים האחרונים. עם זאת, קיים פער טכנולוגי גדול בין מחקר מעבדה לייצור מיומנויות תעשייתיות. בהתאם למדיניות הרגולטורית, וכדי לעמוד בדרישות הירוקות של תעשיית CGT, אומצו מערכות סגורות אוטומטיות לייצור טיפולים תאיים.עבור תאים דבקים, גידול באמצעות מיקרו-נשאים בביוריאקטורים מדרגיים של מיכלי ערבוב, הוא שיטה מבטיחה. באופן קונבנציונלי, מיקרו-נשאים מסחריים אינם רצויים. קצירת תאים באמצעות טריפסיניזציה והצלת מיקרו-נשאים לפי גודל היא לא רק לא יעילה ומאתגרת, אלא גם משפיעה על איכות התאים וגורמת לבעיות בטיחות.במחקר זה, השגנו בהצלחה ייצור תאים בקנה מידה גדול המבוסס על מיקרו-נשאים מתמוססים תלת-ממדיים של TableTrix ברמת GMP במערכת אוטומטית וסגורה. יותר מ-11 מיליארד תאי גזע מזנכימליים אנושיים נוצרו בהרחבה דו-שלבית בתוך תשעה ימים. הדגמנו גם תרבית בצפיפות גבוהה של תאי HEK293T ותאי ורו, שבה שתי הצפיפויות הגיעו ליותר מ-10 מיליון תאים למיליליטר.פלטפורמת ייצור ביולוגי מתקדמת זו מאפשרת להרחיב ביעילות את תאי ההיצמדות ולקצור אותם לחלוטין באופן אוטומטי וסגור. הפרוטוקול שלנו מציע הזדמנות לשפר את יעילות הייצור ולחדד את בקרת האיכות בייצור בקנה מידה תעשייתי של מוצרי CGT.

ייצור תאים בקנה מידה גדול המבוסס על מיקרו-נשאים נקבוביים נמסים ברמת GMP (תנאי ייצור נאותים)

Abstract