Een aangepaste op optische dichtheid gebaseerde microplaattest voor het karakteriseren van actinobacteriofaaginfectie

Bacteriofagen zijn een belangrijk onderdeel van natuurlijke omgevingen en ze hebben een krachtig vermogen om bacteriële populaties te vormen. Om te begrijpen hoe individuele fagen interageren met langzaam groeiende bacteriële gastheren zoals actinomyceten, is een eenvoudige en betrouwbare methode nodig voor het kwantificeren van bacteriële groei op lange termijn in de aanwezigheid van fagen. Spectrofotometrische microplaatlezers maken herhaalde metingen met een hoge doorvoer mogelijk, maar het incuberen van een klein volume voor een langere tijd kan technische uitdagingen opleveren. Deze procedure past een standaard 96-well microplaat aan om de co-kweek van fagen en bacteriën mogelijk te maken zonder subbemonstering gedurende 96 uur, waarbij de bacteriegroei elke 8 uur wordt geregistreerd met behulp van spectrofotometrische absorptiewaarden. Deze optische dichtheidswaarden worden geanalyseerd met behulp van R om infectiestatistieken op te leveren, waaronder de procentuele groeiremming, relatieve virulentie en de Stacy-Ceballos-index. De hier beschreven methoden bieden een effectieve manier om experimenten met de microplaatgroeicurve van langere duur uit te voeren en te analyseren en omvatten wijzigingen om verdamping en condensatie van het deksel te verminderen. Deze protocollen vergemakkelijken microplaatgebaseerde testen van interacties tussen langzaam groeiende bacteriële gastheren en hun bacteriofagen.