Dosage adapté sur microplaques basé sur la densité optique pour caractériser l’infection par actinobacteriophages

Les bactériophages sont un élément clé des environnements naturels et ils ont une puissante capacité à façonner les populations bactériennes. Pour comprendre comment les phages individuels interagissent avec des hôtes bactériens à croissance lente tels que les actinomycètes, une méthode simple et fiable pour quantifier la croissance bactérienne à long terme en présence de phages est nécessaire. Les lecteurs de microplaques spectrophotométriques permettent des mesures répétées à haut débit, mais l’incubation d’un petit volume pendant une période prolongée peut présenter des défis techniques. Cette procédure adapte une microplaque standard de 96 puits pour permettre la co-culture de phages et de bactéries sans sous-échantillonnage pendant 96 h, la croissance bactérienne étant enregistrée toutes les 8 heures à l’aide de valeurs d’absorbance spectrophotométriques. Ces valeurs de densité optique sont analysées à l’aide de R pour obtenir des mesures d’infection, y compris le pourcentage d’inhibition de la croissance, la virulence relative et l’indice Stacy-Ceballos. Les méthodes décrites ici fournissent un moyen efficace de mener et d’analyser des expériences de courbe de croissance de microplaques de longue durée et comprennent des modifications pour réduire l’évaporation et la condensation du couvercle. Ces protocoles facilitent les essais sur microplaques des interactions entre les hôtes bactériens à croissance lente et leurs bactériophages.