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Biology

एक्टिनोबैक्टीरियोफेज संक्रमण को चिह्नित करने के लिए एक अनुकूलित ऑप्टिकल घनत्व-आधारित माइक्रोप्लेट परख

Published: June 30th, 2023

DOI:

10.3791/65482

1Department of Biology, Ouachita Baptist University, 2Department of Mathematical Sciences, University of Arkansas

Abstract

बैक्टीरियोफेज प्राकृतिक वातावरण का एक महत्वपूर्ण हिस्सा हैं, और उनके पास बैक्टीरिया की आबादी को आकार देने की एक शक्तिशाली क्षमता है। यह समझने के लिए कि व्यक्तिगत फेज एक्टिनोमाइसेट्स जैसे धीमी गति से बढ़ने वाले जीवाणु मेजबानों के साथ कैसे बातचीत करते हैं, फेज की उपस्थिति में दीर्घकालिक जीवाणु विकास को निर्धारित करने के लिए एक आसान और विश्वसनीय विधि की आवश्यकता होती है। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक माइक्रोप्लेट रीडर उच्च-थ्रूपुट बार-बार माप की अनुमति देते हैं, लेकिन विस्तारित समय के लिए एक छोटी मात्रा को इनक्यूबेट करना तकनीकी चुनौतियां पेश कर सकता है। यह प्रक्रिया 96 घंटे के लिए उप-नमूनाकरण के बिना फेज और बैक्टीरिया के सह-संवर्धन की अनुमति देने के लिए एक मानक 96-वेल माइक्रोप्लेट को अनुकूलित करती है, जिसमें स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक अवशोषण मूल्यों का उपयोग करके हर 8 घंटे में बैक्टीरिया की वृद्धि दर्ज की जाती है। इन ऑप्टिकल घनत्व मूल्यों का विश्लेषण संक्रमण मैट्रिक्स उत्पन्न करने के लिए आर का उपयोग करके किया जाता है, जिसमें प्रतिशत वृद्धि अवरोध, सापेक्ष विषाणु और स्टेसी-सेबालोस सूचकांक शामिल हैं। यहां उल्लिखित विधियां विस्तारित अवधि के माइक्रोप्लेट विकास वक्र प्रयोगों का संचालन और विश्लेषण करने का एक प्रभावी तरीका प्रदान करती हैं और इसमें वाष्पीकरण और ढक्कन संघनन को कम करने के लिए संशोधन शामिल हैं। ये प्रोटोकॉल धीमी गति से बढ़ने वाले जीवाणु मेजबानों और उनके बैक्टीरियोफेज के बीच बातचीत के माइक्रोप्लेट-आधारित परख की सुविधा प्रदान करते हैं।

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