Sojabønnebehåret rodtransformation til analyse af genfunktion

Sojabønner (Glycine max) er en værdifuld afgrøde i landbruget, der har tusindvis af industrielle anvendelser. Sojabønnerødder er det primære sted for interaktion med jordbårne mikrober, der danner symbiose for at fiksere nitrogen og patogener, hvilket gør forskning, der involverer sojabønnerodgenetik, af største betydning for at forbedre landbrugsproduktionen. Den genetiske transformation af sojabønnehårede rødder (HR'er) medieres af Agrobacterium rhizogenes-stammen NCPPB2659 (K599) og er et effektivt værktøj til at studere genfunktionen i sojabønnerødder, der kun tager 2 måneder fra start til slut. Her giver vi en detaljeret protokol, der skitserer metoden til overekspression og hæmning af et gen af interesse for sojabønne-HR'er. Denne metode omfatter sterilisering af sojabønnefrø, infektion af kimblade med K599 og udvælgelse og høst af genetisk transformerede HR'er til RNA-isolering og, hvis det er berettiget, metabolitanalyser. Tilgangens gennemstrømning er tilstrækkelig til samtidig at studere flere gener eller netværk og kunne bestemme de optimale tekniske strategier, inden man forpligter sig til langsigtede stabile transformationsmetoder.