Transformação de raízes pilosas de soja para análise da função gênica

A soja (Glycine max) é uma cultura valiosa na agricultura que tem milhares de usos industriais. As raízes de soja são o principal sítio de interação com micróbios de solo que formam simbiose para fixar nitrogênio e patógenos, o que torna as pesquisas envolvendo genética de raízes de soja de importância primordial para melhorar sua produção agrícola. A transformação genética de raízes pilosas (HRs) de soja é mediada pela linhagem Agrobacterium rhizogenes NCPPB2659 (K599) e é uma ferramenta eficiente para estudar a função gênica em raízes de soja, levando apenas 2 meses do início ao fim. Aqui, nós fornecemos um protocolo detalhado que descreve o método para superexpressar e silenciar um gene de interesse em HRs de soja. Essa metodologia inclui a esterilização de sementes de soja, a infecção de cotilédones com K599 e a seleção e colheita de HRs geneticamente transformados para isolamento de RNA e, se necessário, análises de metabólitos. O rendimento da abordagem é suficiente para estudar simultaneamente vários genes ou redes e pode determinar as estratégias de engenharia ótimas antes de se comprometer com abordagens de transformação estável de longo prazo.