Трансформация волосатого корня сои для анализа функции генов

Summary

Здесь мы представляем протокол высокоэффективного производства трансгенных волосатых корней сои.

Abstract

Соя (Glycine max) является ценной культурой в сельском хозяйстве, которая имеет тысячи промышленных применений. Корни сои являются основным местом взаимодействия с почвенными микробами, которые образуют симбиоз для фиксации азота и патогенов, что делает исследования, связанные с генетикой корней сои, первостепенной важностью для улучшения ее сельскохозяйственного производства. Генетическая трансформация волосатых корней сои (HRs) опосредована штаммом Agrobacterium rhizogenes NCPPB2659 (K599) и является эффективным инструментом для изучения функции генов в корнях сои, занимая всего 2 месяца от начала до конца. Здесь мы приводим подробный протокол, в котором описывается метод сверхэкспрессии и подавления гена, представляющего интерес для HR сои. Эта методология включает стерилизацию семян сои, заражение семядолей K599, а также отбор и сбор генетически трансформированных HR для выделения РНК и, при необходимости, анализа метаболитов. Пропускная способность подхода достаточна для одновременного изучения нескольких генов или сетей и может определить оптимальные инженерные стратегии до перехода к долгосрочным подходам к стабильной трансформации.

Introduction

Соя (Glycine max) является одной из самых ценных культур в сельском хозяйстве. Он имеет тысячи коммерческих и промышленных применений, таких как продукты питания, корма для животных, масло, а также в качестве источника сырья для производства¹. Его способность формировать симбиотические отношения с азотфиксирующими почвенными микроорганизмами, а именно ризобиями, еще больше повышает важность изучения генетики сои². Например, тонкая настройка азотфиксирующих свойств в корнях сои может привести к сокращению выбросов углерода и значительно снизить потребность в азотных удобрениях³. Таким обра....

Protocol

ПРИМЕЧАНИЕ: Рекомендуется, чтобы все процессуальные действия проводились в стерильных условиях.

1. Стерилизация семян сои

1. В шкаф биобезопасности поместите 16-20 круглых семян сои Williams 82 в первозданном состоянии (т. е. без трещин или пятен) в центрифужную проби.......

Discussion

В течение последнего десятилетия был разработан метод HR сои в качестве мощного инструмента для изучения генов, участвующих в фиксации азота 22,23, биотической и абиотической стрессоустойчивости 24,25 и путях биосинтеза метаболитов ^26,27.^<.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acetosyringone	Cayman	23224
Bleach	lavo	21124
DMSO	Fisher bioreagents	195679
Gelzan	Phytotech	HYY3251089A
Hygromycin	Phytotech	HHA0397050B
Isopropyl alcohol	Fisher chemical	206462
Kanamycin	Phytotech	SQS0378007G
LB powder	Fisher bioreagents	200318
MS powder	Caisson labs	2210001
Na2HPO4	Fisher bioreagents	194171
NaCl	Fisher chemical	192946
Petri dishes	Fisherbrand	08-757-11	100 mm x 25 mm
Phosphinothricin	Cedarlane	P034-250MG
REDExtract-N-Amp PCR Kit	Sigma	R4775
Sucrose	Bioshop	2D76475
Timentin	Caisson labs	12222002
Vitamins	Caisson labs	2211010