A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
מאמר זה מפרט את תהליך הייצור של תאי T קולטני אנטיגן כימריים לשימוש קליני, במיוחד באמצעות מעבד תאים אוטומטי המסוגל לבצע התמרה נגיפית וטיפוח של תאי T. אנו מספקים המלצות ומתארים מלכודות שיש לקחת בחשבון במהלך תהליך הפיתוח והיישום של ניסוי קליני בשלב מוקדם.
תאי קולטן אנטיגן כימרי (CAR)-T מייצגים גישה אימונותרפית מבטיחה לטיפול במחלות ממאירות ולא ממאירות שונות. תאי CAR-T הם תאי T מהונדסים גנטית המבטאים חלבון כימרי המזהה ונקשר למטרה על פני התא, וכתוצאה מכך הורג את תא המטרה. שיטות ייצור מסורתיות של תאי CAR-T הן עתירות עבודה, יקרות ועלולות לשאת סיכון לזיהום. CliniMACS Prodigy, מעבד תאים אוטומטי, מאפשר לייצר מוצרי תרפיה תאית בקנה מידה קליני במערכת סגורה, תוך מזעור הסיכון לזיהום. העיבוד מתבצע באופן חצי אוטומטי בשליטת המחשב ובכך ממזער את המעורבות האנושית בתהליך, מה שחוסך זמן ומפחית שונות ושגיאות.
כתב יד וסרטון זה מתאר את תהליך התמרת תאי T (TCT) לייצור תאי CAR-T באמצעות מעבד זה. תהליך ה-TCT כולל העשרה, הפעלה והעברה של תאי T מסוג CD4+/CD8+, התמרה באמצעות וקטור נגיפי, הרחבה וקציר. באמצעות מטריצת הפעילות, פונקציונליות המאפשרת הזמנה ותזמון של שלבים אלה, ניתן להתאים אישית את תהליך TCT באופן נרחב. אנו מספקים הדרכה על ייצור תאי CAR-T בהתאם לתנאי ייצור נאותים (cGMP) הנוכחיים ודנים בבדיקות שחרור נדרשות ובניסויים פרה-קליניים שיתמכו ביישום תרופה ניסיונית חדשה (IND). אנו מדגימים את ההיתכנות ודנים ביתרונות ובחסרונות של שימוש בתהליך חצי אוטומטי לייצור תאי CAR-T קליניים. לבסוף, אנו מתארים ניסוי קליני מתמשך ביוזמת חוקר המתמקד בממאירויות של תאי B בילדים [NCT05480449] כדוגמה לאופן שבו תהליך ייצור זה יכול להיות מיושם בסביבה קלינית.
העברה מאומצת של תאי T שהונדסו לבטא קולטן אנטיגן כימרי (CAR) הראתה יעילות יוצאת דופן בטיפול בחולים עם ממאירויות עקשניות של תאי B 1,2,3,4,5. עם זאת, שיטות הייצור המסורתיות של תאי CAR-T הן עתירות עבודה, גוזלות זמן רב, ודורשות טכנאים מיומנים מאוד לביצוע צעדים מיוחדים ביותר. לדוגמה, תהליך הייצור המסורתי של מוצר תאי CAR-T אוטולוגי כולל צנטריפוגה הדרגתית של צפיפות, אלוטריזציה או הפרדה מגנטית להעשרת תאי T, הפעלה והתמרה עם וקטור נגיפי בצלוחית סטרילית, והתפשטות בביוריאקטור לפני הקציר והפורמולציה. לאחרונה צצו מערכות ש....
כל המחקר בוצע בהתאם להנחיות המוסדיות ובאישור ועדת הביקורת המוסדית של בית החולים (IRB), וכל הנבדקים נתנו הסכמה מדעת לפרסום הנתונים שנאספו במסגרת הניסוי.
הערה: החלק הראשון של הפרוטוקול מספק סקירה ברמה גבוהה של תהליך הייצור של CAR-T. שאר הסעיפים מספקים את ההוראות שלב אחר שלב. הפרוטוקול מתאר את ז.......
תוצאות משלוש ריצות הייצור הראשונות של CAR-T בניסוי NCT05480449 מוצגות להלן בטבלה 3. חומר המוצא, וקטור, ציטוקינים בתרבית וריכוזי AB בסרום נשמרו עקביים בכל ריצה. המוצרים נקטפו ביום 7 או 8. צמיחת התאים היומית הממוצעת הייתה 46% (עלייה בספירת התאים הכוללת), מה שמצביע על כך שתהליך ה-TCT היה יעיל בקידום.......
טיפול בתאי CAR-T התגלה כגישה טיפולית מבטיחה עבור תאי B וממאירויות אחרות. עם זאת, לשיטות ייצור מסורתיות של תאי CAR-T יש מספר מגבלות, כגון עלות גבוהה, ייצור עתיר עבודה וצעדים פתוחים המגבירים את הסיכון לזיהום. לאחרונה, מספר פלטפורמות אוטומטיות למחצה, כולל Miltenyi CliniMACS Prodigy ("המעבד"), צצו כדי להתמודד עם מ.......
המחברים רוצים להכיר בתרומתם של מספר אנשים וארגונים לעבודה זו. המעבדה לתרפיה תאית וגנטית והמעבדה למחקרי תרגום וקורלציה של פן סיפקו סיוע רב ערך בפיתוח תהליכים ובהכנה להגשות IND. מליסה ורגזה ואמנדה דינופיה תרמו לתהליך, הפיתוח וההכנה להגשות IND העומדות בבסיס כתב היד הזה. עבודה זו נתמכה על ידי מענק האצה של התא ותרפיה גנטית שיתופית של בית החולים לילדים של פילדלפיה. המחברים רוצים גם להודות ל-Miltenyi Biotec על התמיכה הטכנית והמחקרית שלהם. איור 1 מכוסה על ידי זכויות יוצרים © 2023 Miltenyi Biotec B.V. &; Co. KG; כל הזכויות שמורות.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
12 x 75 borosilicate tubes | Charles River | TL1000 | |
20 mL Reagent Bag | Miltenyi Biotec | 170-076-631 | |
50 mL Conical Tube | Fisher | 05-539-10 | |
150 mL Transfer Set | Fenwal | 4R2001 | |
2,000 mL Transfer Set | Fenwal | 4R2041 | |
7AAD | Fisher Scientific | BDB559925 | |
Alcohol Prep | Tyco/Healthcare | ||
Bag Access | Medline | 2300E-0500 | |
CD19 APC-Vio770 REAfinity | Miltenyi Biotec | 130-113-643 | |
CD19 CAR Detection Reagent Biotin | Miltenyi Biotec | 130-129-550 | |
CD19 PE | BD | 555413 | |
CD3 APC | BD | 340440 | |
CD4 VioBright FITC REAfinity | Miltenyi Biotec | 130-113-229 | |
CD45 VioBlue REAfinity | Miltenyi Biotec | 130-110-637 | |
CD8 APC-Vio770 REAfinity | Miltenyi Biotec | 130-110-681 | |
Cellometer Reference Beads 10um | Nexcelom | B10-02-020 | |
Cellometer Reference Beads 15um | Nexcelom | B15-02-010 | |
Cellometer Reference Beads 5um | Nexcelom | B05-02-050 | |
Cellometer Slides | Nexcelom | CHT4-SD100-002 | |
CliniMACS CD4 GMP MicroBeads | Miltenyi Biotec | 276-01 | The CD4 reagent |
CliniMACS CD8 GMP MicroBeads | Miltenyi Biotec | 275-01 | The CD8 reagent |
CliniMACS PBS/EDTA Buffer | Miltenyi Biotec | 130-021-201 | The buffer |
DMSO | Origen | CP-10 | |
Freezing Bag 50 mL | Miltenyi Biotec | 200-074-400 | |
Freezing Vial, 1.8 mL | Nunc | 12565171N | |
Freezing Vial, 4.5 mL | Nunc | 12565161N | |
Human AB serum | Valley Biomedical | Sterile filtered, heat inactivated | |
Human Serum Albumin 25% | Grifols | 68516-5216-1 | |
Human Serum Albumin 5% | Grifols | 68516-5214-1 | |
MACS GMP Recombinant Human IL-2 | Miltenyi Biotec | 170-076-148 | The cytokines |
MACS GMP T Cell TransAct | Miltenyi Biotec | 200-076-202 | The activation reagent |
MycoSeq Mycoplasma Detection Kit | Life Technologies | 4460623 | |
Needles, Hypodermic 14G | Medline | SWD200573 | |
Needles, SlideSafe 18G | BD | B-D305918 | |
Pipet tips, 2-200 μL, individually wrapped | Eppendorf | 022492209 | |
Pipet tips, 50-1000 μL, individually wrapped | Eppendorf | 022492225 | |
Pipets 10 mL | Fisher | 13-678-27F | |
Pipets 25 mL | Fisher | 13-675-30 | |
Pipets 5 mL | Fisher | 13-678-27E | |
Plasmalyte-A | Baxter | 2B2544X | The electrolyte solution |
Prodigy TS520 Tubing Set | Miltenyi Biotec | 170-076- 600 | The tubing set |
Sterile Field | Medline | NON21001 | |
Streptavidin PE-Vio770 | Miltenyi Biotec | 130-106-793 | |
Syringe 1 mL | BD | 309628 | |
Syringe 10 mL | BD | 302995 | |
Syringe 3 mL | BD | 309657 | |
Syringe 30 mL | BD | 302832 | |
Syringe 50 mL | BD | 309653 | |
TexMACS GMP Medium | Miltenyi Biotec | 170-076-306 | The medium |
Triple Sampling Adapter | Miltenyi Biotec | 170-076-609 | |
Viral Vector | CHOP Clinical Vector Core | huCART19 | |
Equipment | |||
Biological Safety Cabinet | The Baker Co | ||
Cellometer Auto 2000 | Nexcelom | ||
CliniMACS Prodigy | Miltenyi Biotec | 200-075-301 | The processor |
Controlled Rate Freezer | Planer/Kryosave | ||
Endosafe nexgen-PTS150K | Charles River | ||
Mettler Balance | Mettler | ||
Refrigerated Centrifuge | Thermo Fisher | ||
Refrigerated Centrifuge | Fisher Sci | ||
SCD Sterile Tubing Welder | Terumo | ||
Sebra Tube Sealer | Sebra | ||
Varitherm | Barkey | The dry thaw device | |
XN-330 Hematology Analyzer | Sysmex |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved