A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
В этой статье подробно описан процесс производства Т-клеток с химерным антигенным рецептором для клинического использования, в частности, с использованием автоматизированного клеточного процессора, способного выполнять вирусную трансдукцию и культивирование Т-клеток. Мы даем рекомендации и описываем подводные камни, которые следует учитывать при разработке процесса и проведении ранней фазы клинического исследования.
Химерные антигенные рецепторы (CAR)-Т-клетки представляют собой перспективный иммунотерапевтический подход для лечения различных злокачественных и доброкачественных заболеваний. CAR-T-клетки — это генетически модифицированные Т-клетки, которые экспрессируют химерный белок, который распознает и связывается с мишенью на поверхности клетки, что приводит к уничтожению клетки-мишени. Традиционные методы производства CAR-T-клеток являются трудоемкими, дорогостоящими и могут быть сопряжены с риском загрязнения. CliniMACS Prodigy, автоматизированный клеточный процессор, позволяет производить продукты клеточной терапии в клиническом масштабе в закрытой системе, сводя к минимуму риск загрязнения. Обработка происходит в полуавтоматическом режиме под контролем компьютера и таким образом минимизирует участие человека в процессе, что экономит время и снижает вариативность и ошибки.
В этой рукописи и видео описывается процесс трансдукции Т-клеток (TCT) для производства CAR-T-клеток с использованием этого процессора. Процесс ТСТ включает обогащение, активацию, трансдукцию вирусным вектором CD4+/CD8+ Т-клеток, экспансию и сбор CD4+/CD8+ Т-клеток. С помощью Activity Matrix, функциональности, которая позволяет упорядочивать и определять время выполнения этих шагов, процесс TCT может быть полностью настроен. Мы проводим экскурсию по производству CAR-T-клеток в соответствии с действующей надлежащей производственной практикой (cGMP) и обсуждаем необходимые испытания и доклинические эксперименты, которые будут поддерживать заявку на экспериментальное новое лекарственное средство (IND). Мы демонстрируем осуществимость и обсуждаем преимущества и недостатки использования полуавтоматического процесса для клинического производства CAR-T-клеток. Наконец, мы описываем продолжающееся клиническое исследование, инициированное исследователем, которое нацелено на злокачественные новообразования у детей [NCT05480449] в качестве примера того, как этот производственный процесс может быть применен в клинических условиях.
Адоптивный перенос Т-клеток, сконструированных для экспрессии химерного антигенного рецептора (CAR), показал замечательную эффективность в лечении пациентов с рефрактерными В-клеточными злокачественными новообразованиями 1,2,3,4,5. Однако традиционные методы производства CAR-T-клеток являются трудоемкими, отнимают много времени и требуют высококвалифицированных технических специалистов для выполнения узкоспециализированных этапов. Например, традиционный процесс производства аутологичного CAR-T-клеточного пр....
Все исследования были проведены в соответствии с институциональными рекомендациями с одобрения Институционального наблюдательного совета больницы (IRB), и все субъекты предоставили информированное согласие на публикацию данных, собранных в контексте исследования.
ПРИМЕЧАНИЕ: В пер?.......
Результаты первых трех серий производства CAR-T в рамках исследования NCT05480449 представлены ниже в таблице 3. Исходный материал, вектор, культуральные цитокины и концентрации АТ в сыворотке крови поддерживались постоянными для каждого запуска. Продукты собирали на 7 или 8 день. Сре?.......
CAR-T-клеточная терапия стала перспективным подходом к лечению В-клеточных и других злокачественных новообразований. Однако традиционные методы производства CAR-T-клеток имеют ряд ограничений, таких как высокая стоимость, трудоемкое производство и открытые этапы, которые увеличивают рис.......
Авторы выражают признательность нескольким лицам и организациям за вклад в эту работу. Лаборатория клеточной и генной терапии и Лаборатория трансляционных и коррелятивных исследований Пенсильванского университета оказали ценную помощь в разработке процессов и подготовке к подаче заявок на IND. Мелисса Варгезе (Melissa Varghese) и Аманда ДиНофиа (Amanda DiNofia) внесли свой вклад в разработку процесса и подготовку к подаче заявок на IND, которые легли в основу этой рукописи. Эта работа была поддержана грантом Acceleration Grant of the Cell and Gene Therapy Collaborative of the Children's Hospital of Philadelphia. Авторы также хотели бы поблагодарить компанию Miltenyi B....
Name | Company | Catalog Number | Comments |
12 x 75 borosilicate tubes | Charles River | TL1000 | |
20 mL Reagent Bag | Miltenyi Biotec | 170-076-631 | |
50 mL Conical Tube | Fisher | 05-539-10 | |
150 mL Transfer Set | Fenwal | 4R2001 | |
2,000 mL Transfer Set | Fenwal | 4R2041 | |
7AAD | Fisher Scientific | BDB559925 | |
Alcohol Prep | Tyco/Healthcare | ||
Bag Access | Medline | 2300E-0500 | |
CD19 APC-Vio770 REAfinity | Miltenyi Biotec | 130-113-643 | |
CD19 CAR Detection Reagent Biotin | Miltenyi Biotec | 130-129-550 | |
CD19 PE | BD | 555413 | |
CD3 APC | BD | 340440 | |
CD4 VioBright FITC REAfinity | Miltenyi Biotec | 130-113-229 | |
CD45 VioBlue REAfinity | Miltenyi Biotec | 130-110-637 | |
CD8 APC-Vio770 REAfinity | Miltenyi Biotec | 130-110-681 | |
Cellometer Reference Beads 10um | Nexcelom | B10-02-020 | |
Cellometer Reference Beads 15um | Nexcelom | B15-02-010 | |
Cellometer Reference Beads 5um | Nexcelom | B05-02-050 | |
Cellometer Slides | Nexcelom | CHT4-SD100-002 | |
CliniMACS CD4 GMP MicroBeads | Miltenyi Biotec | 276-01 | The CD4 reagent |
CliniMACS CD8 GMP MicroBeads | Miltenyi Biotec | 275-01 | The CD8 reagent |
CliniMACS PBS/EDTA Buffer | Miltenyi Biotec | 130-021-201 | The buffer |
DMSO | Origen | CP-10 | |
Freezing Bag 50 mL | Miltenyi Biotec | 200-074-400 | |
Freezing Vial, 1.8 mL | Nunc | 12565171N | |
Freezing Vial, 4.5 mL | Nunc | 12565161N | |
Human AB serum | Valley Biomedical | Sterile filtered, heat inactivated | |
Human Serum Albumin 25% | Grifols | 68516-5216-1 | |
Human Serum Albumin 5% | Grifols | 68516-5214-1 | |
MACS GMP Recombinant Human IL-2 | Miltenyi Biotec | 170-076-148 | The cytokines |
MACS GMP T Cell TransAct | Miltenyi Biotec | 200-076-202 | The activation reagent |
MycoSeq Mycoplasma Detection Kit | Life Technologies | 4460623 | |
Needles, Hypodermic 14G | Medline | SWD200573 | |
Needles, SlideSafe 18G | BD | B-D305918 | |
Pipet tips, 2-200 μL, individually wrapped | Eppendorf | 022492209 | |
Pipet tips, 50-1000 μL, individually wrapped | Eppendorf | 022492225 | |
Pipets 10 mL | Fisher | 13-678-27F | |
Pipets 25 mL | Fisher | 13-675-30 | |
Pipets 5 mL | Fisher | 13-678-27E | |
Plasmalyte-A | Baxter | 2B2544X | The electrolyte solution |
Prodigy TS520 Tubing Set | Miltenyi Biotec | 170-076- 600 | The tubing set |
Sterile Field | Medline | NON21001 | |
Streptavidin PE-Vio770 | Miltenyi Biotec | 130-106-793 | |
Syringe 1 mL | BD | 309628 | |
Syringe 10 mL | BD | 302995 | |
Syringe 3 mL | BD | 309657 | |
Syringe 30 mL | BD | 302832 | |
Syringe 50 mL | BD | 309653 | |
TexMACS GMP Medium | Miltenyi Biotec | 170-076-306 | The medium |
Triple Sampling Adapter | Miltenyi Biotec | 170-076-609 | |
Viral Vector | CHOP Clinical Vector Core | huCART19 | |
Equipment | |||
Biological Safety Cabinet | The Baker Co | ||
Cellometer Auto 2000 | Nexcelom | ||
CliniMACS Prodigy | Miltenyi Biotec | 200-075-301 | The processor |
Controlled Rate Freezer | Planer/Kryosave | ||
Endosafe nexgen-PTS150K | Charles River | ||
Mettler Balance | Mettler | ||
Refrigerated Centrifuge | Thermo Fisher | ||
Refrigerated Centrifuge | Fisher Sci | ||
SCD Sterile Tubing Welder | Terumo | ||
Sebra Tube Sealer | Sebra | ||
Varitherm | Barkey | The dry thaw device | |
XN-330 Hematology Analyzer | Sysmex |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved