Kvantificering, levedygtighedsvurdering og visualiseringsstrategier for Acinetobacter biofilm

Acinetobacter forårsager nosokomielle infektioner, og dets biofilmdannelse kan bidrage til overlevelse på tørre overflader såsom hospitalsmiljøer. Biofilmkvantificering og visualisering er således vigtige metoder til at vurdere potentialet for Acinetobacter-stammer til at forårsage nosokomielle infektioner. De biofilm, der dannes på overfladen af mikropladen, kan kvantificeres med hensyn til volumen og celleantal. Biofilmvolumener kan kvantificeres ved farvning ved hjælp af krystalviolet, vask, farvning ved hjælp af ethanol og derefter måling af det opløselige farvestof ved hjælp af en mikropladelæser. For at kvantificere antallet af celler, der er indlejret i biofilmene, skrottes biofilmene ved hjælp af celleskrabere, høstes i saltvand, omrøres kraftigt i nærværelse af glasperler og spredes på Acinetobacter agar. Derefter inkuberes pladerne ved 30 °C i 24-42 timer. Efter inkubation opregnes de røde kolonier for at estimere antallet af celler i biofilm. Denne levedygtige tællemetode kan også være nyttig til tælling af Acinetobacter-celler i biofilm med blandede arter. Acinetobacter biofilm kan visualiseres ved hjælp af fluorescerende farvestoffer. En kommercielt tilgængelig mikroplade designet til mikroskopisk analyse anvendes til dannelse af biofilm. Derefter farves de bundoverflademonterede biofilm med SYTO9- og propidiumiodidfarvestoffer, vaskes og visualiseres derefter med konfokal laserscanningsmikroskopi.