Kwantificerings-, levensvatbaarheidsbeoordeling en visualisatiestrategieën voor Acinetobacter-biofilms

Acinetobacter veroorzaakt nosocomiale infecties en de vorming van biofilm kan bijdragen aan de overleving op droge oppervlakken zoals ziekenhuisomgevingen. Kwantificering en visualisatie van biofilm zijn dus belangrijke methoden om het potentieel van Acinetobacter-stammen om nosocomiale infecties te veroorzaken te beoordelen. De biofilms die zich op het oppervlak van de microplaat vormen, kunnen worden gekwantificeerd in termen van volume en celaantallen. Biofilmvolumes kunnen worden gekwantificeerd door te kleuren met kristalviolet, te wassen, te kleuren met ethanol en vervolgens de opgeloste kleurstof te meten met behulp van een microplaatlezer. Om het aantal cellen dat in de biofilms is ingebed te kwantificeren, worden de biofilms afgeschraapt met behulp van celschrapers, geoogst in de zoutoplossing, krachtig geroerd in aanwezigheid van glasparels en verspreid op Acinetobacter-agar. Vervolgens worden de platen gedurende 24-42 uur bij 30 °C geïncubeerd. Na incubatie worden de rode kolonies opgesomd om het aantal cellen in biofilms te schatten. Deze haalbare telmethode kan ook nuttig zijn voor het tellen van Acinetobacter-cellen in biofilms van gemengde soorten. Acinetobacter-biofilms kunnen worden gevisualiseerd met behulp van fluorescerende kleurstoffen. Een in de handel verkrijgbare microplaat die is ontworpen voor microscopische analyse wordt gebruikt om biofilms te vormen. Vervolgens worden de aan de onderkant bevestigde biofilms gekleurd met SYTO9- en propidiumjodidekleurstoffen, gewassen en vervolgens gevisualiseerd met confocale laserscanmicroscopie.