Kvantifisering, levedyktighetsvurdering og visualiseringsstrategier for Acinetobacter biofilmer

Acinetobacter forårsaker nosokomiale infeksjoner, og biofilmdannelsen kan bidra til overlevelse på tørre overflater som sykehusmiljøer. Dermed er biofilmkvantifisering og visualisering viktige metoder for å vurdere potensialet til Acinetobacter-stammer for å forårsake nosokomiale infeksjoner. Biofilmene som dannes på overflaten av mikroplaten kan kvantifiseres når det gjelder volum og cellenummer. Biofilmvolumer kan kvantifiseres ved farging med krystallfiolett, vasking, avfarging ved bruk av etanol, og deretter måle det oppløselige fargestoffet ved hjelp av en mikroplateleser. For å kvantifisere antall celler som er innebygd i biofilmene, blir biofilmene skrapt av ved hjelp av celleskrapere, høstet i saltvannet, kraftig omrørt i nærvær av glassperler og spredt på Acinetobacter-agar. Deretter inkuberes platene ved 30 °C i 24-42 timer. Etter inkubering er de røde koloniene oppregnet for å estimere antall celler i biofilmer. Denne levedyktige tellemetoden kan også være nyttig for å telle Acinetobacter-celler i biofilm med blandede arter. Acinetobacter biofilmer kan visualiseres ved hjelp av fluorescerende fargestoffer. En kommersielt tilgjengelig mikroplate designet for mikroskopisk analyse brukes til å danne biofilmer. Deretter blir de bunnflatefestede biofilmene farget med SYTO9 og propidiumjodidfarger, vasket og deretter visualisert med konfokal laserskanningsmikroskopi.