Kvantifiering, viabilitetsbedömning och visualiseringsstrategier för biofilmer av acinetobacter

Acinetobacter orsakar nosokomiala infektioner och dess biofilmbildning kan bidra till överlevnad på torra ytor som sjukhusmiljöer. Kvantifiering och visualisering av biofilm är därför viktiga metoder för att bedöma potentialen hos Acinetobacter-stammar att orsaka nosokomiala infektioner. De biofilmer som bildas på mikroplattans yta kan kvantifieras i termer av volym och cellantal. Biofilmvolymer kan kvantifieras genom färgning med kristallviolett, tvättning, avfärgning med etanol och sedan mätning av det lösliga färgämnet med hjälp av en mikroplattläsare. För att kvantifiera antalet celler som är inbäddade i biofilmerna skrapas biofilmerna bort med hjälp av cellskrapor, skördas i saltlösningen, omrörs kraftigt i närvaro av glaspärlor och sprids på Acinetobacter-agar. Därefter inkuberas plattorna vid 30 °C i 24-42 timmar. Efter inkubationen räknas de röda kolonierna upp för att uppskatta antalet celler i biofilmerna. Denna livskraftiga räkningsmetod kan också vara användbar för att räkna Acinetobacter-celler i biofilmer av blandade arter. Biofilmer från Acinetobacter kan visualiseras med hjälp av fluorescerande färgämnen. En kommersiellt tillgänglig mikroplatta avsedd för mikroskopisk analys används för att bilda biofilmer. Därefter färgas de biofilmer som fästs på bottenytan med SYTO9 och propidiumjodidfärgämnen, tvättas och visualiseras sedan med konfokal laserskanningsmikroskopi.