Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Representative Results
Discussion
Acknowledgements
Materials
References
Neuroscience
वयस्क ज़ेब्राफिश के व्यवहार में फोरब्रेन गतिविधि की दो-फोटॉन कैल्शियम इमेजिंग
यहां, हम वयस्क ज़ेबराफिश के पृष्ठीय अग्रमस्तिष्क में दो-फोटॉन कैल्शियम इमेजिंग करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।
वयस्क ज़ेब्राफ़िश (डेनियो रेरियो) संज्ञानात्मक कार्यों का अध्ययन करने के लिए व्यवहार का एक समृद्ध प्रदर्शन प्रदर्शित करता है। उनके पास एक लघु मस्तिष्क भी है जिसका उपयोग ऑप्टिकल इमेजिंग विधियों के माध्यम से मस्तिष्क क्षेत्रों में गतिविधियों को मापने के लिए किया जा सकता है। हालांकि, वयस्क ज़ेबराफ़िश के व्यवहार में मस्तिष्क गतिविधि की रिकॉर्डिंग पर रिपोर्ट दुर्लभ रही है। वर्तमान अध्ययन वयस्क ज़ेबराफिश के पृष्ठीय अग्रमस्तिष्क में दो-फोटॉन कैल्शियम इमेजिंग करने के लिए प्रक्रियाओं का वर्णन करता है। हम वयस्क ज़ेब्राफ़िश को अपने सिर को हिलाने से रोकने के कदमों पर ध्यान केंद्रित करते हैं, जो स्थिरता प्रदान करता है जो मस्तिष्क गतिविधि की लेजर स्कैनिंग इमेजिंग को सक्षम बनाता है। सिर-नियंत्रित जानवर स्वतंत्र रूप से अपने शरीर के अंगों को हिला सकते हैं और एड्स के बिना सांस ले सकते हैं। प्रक्रिया का उद्देश्य सिर संयम सर्जरी के समय को कम करना, मस्तिष्क की गति को कम करना और दर्ज न्यूरॉन्स की संख्या को अधिकतम करना है। कैल्शियम इमेजिंग के दौरान एक इमर्सिव दृश्य वातावरण प्रस्तुत करने के लिए एक सेटअप भी यहां वर्णित है, जिसका उपयोग नेत्रहीन ट्रिगर व्यवहार ों के अंतर्निहित तंत्रिका सहसंबंधों का अध्ययन करने के लिए किया जा सकता है।
आनुवंशिक रूप से एन्कोडेड संकेतक या सिंथेटिक रंगों के साथ कैल्शियम फ्लोरेसेंस इमेजिंग गैर-मानव प्राइमेट्स, कृन्तकों, पक्षियों और कीड़ों सहित व्यवहार करने वाले जानवरों में न्यूरोनल गतिविधि को मापने का एक शक्तिशाली तरीका रहाहै। मस्तिष्क की सतह के नीचे लगभग 800 μm तक सैकड़ों कोशिकाओं की गतिविधि को मल्टी-फोटॉन इमेजिंग 2,3 का उपयोग करके एक साथ मापा जा सकता है। आनुवंशिक रूप से परिभाषित न्यूरोनल आबादी में कैल्शियम संकेतक व्यक्त करके विशिष्ट सेल प्रकारों की गतिविधि को भी मापा जा सकता है। छोटे कशेरुक मॉडल के लिए इमेजिंग विधि का अनुप्रयोग मस्तिष्क क्षेत्रों में न्यूरोनल गणना के क्षेत्र में नई संभा....
प्रोटोकॉल में दो भाग होते हैं: सिर संयम सर्जरी और फोरब्रेन में न्यूरोनल गतिविधियों की दो-फोटॉन कैल्शियम इमेजिंग। सर्जरी की सफलता को जानवर के अस्तित्व और सिर संयम की स्थिरता से परिभाषित किया गया है। सर.......
यहां, हम दो-फोटॉन कैल्शियम इमेजिंग के लिए वयस्क ज़ेबराफिश के सिर को रोकने के लिए एक विस्तृत प्रोटोकॉल का वर्णन करते हैं। सिर संयम प्राप्त करने के लिए दो महत्वपूर्ण कदम हैं जो लेजर स्कैनिंग इमेजिंग के ल?.......
इस काम को आणविक जीव विज्ञान संस्थान, एकेडेमिया सिनिका, और राष्ट्रीय विज्ञान और प्रौद्योगिकी परिषद, ताइवान द्वारा समर्थित किया गया था। भौतिकी संस्थान, एकेडेमिया सिनिका में मशीन शॉप ने कस्टम-डिज़ाइन किए गए भागों को बनाने में मदद की। हम हेड स्टेज के त्वरित-लॉक तंत्र के डिजाइन के लिए पी आर्गास्ट (फ्रेडरिक मिशर इंस्टीट्यूट फॉर बायोमेडिकल रिसर्च, बेसल, स्विट्जरलैंड) को भी धन्यवाद देना चाहते हैं।
....| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acquisition card | MBF Bioscience | Vidrio vDAQ | Microscope |
| Back-projection film | Kimoto | Diland screen - GSK | present visual stimulus |
| Band-pass filter (510/80 nm) | Chroma | ET510/80m | Microscope |
| Base plate for the semi-hexagonal tank | custom made | see supplemental files | recording chamber |
| Camera filter (<875 nm) | Edmund optics | #86-106 | Behavior recording |
| Camera filter (>700 nm) | Edmund optics | #43-949 | Behavior recording |
| Camera lens | Thorlabs | MVL50M23 | Behavior recording |
| Chameleon Vision-S | Coherent | Vision-S | Laser |
| Circular plate for the head stage | custom made | see supplemental files | recording chamber |
| Controller for piezo actuator | Physik Instrumente | E-665. CR | Microscope |
| Current amplifier | Thorlabs | TIA60 | Microscope |
| Elitedent Q-6 | Rolence Enterprise | Q-6 | Surgery: UV lamp |
| Emission Filter 510/80 nm | Chroma | ET510/80m | Microscope |
| Head bar | custom made | see supplemental files | recording chamber |
| Infrared light | Thorlabs | M810L3 | Behavior recording |
| LED projector | AAXA | P2B LED Pico Projector | present visual stimulus |
| Moist paper tissue (Kimwipe) | Kimtech Science | 34155 | Surgery: moist paper tissue |
| Motorized XY sample stage | Zaber | X-LRM050 | Microscope |
| Neutral Density Filters (50% Transmission) | Thorlabs | NE203B | present visual stimulus |
| Ø1/2" Post Holder | ThorLabs | PH1.5V | Surgery: hollow tube for cannon |
| Ø1/2" Stainless Steel Optical Post | ThorLabs | TR150/M | Surgery: fish loading module |
| Objective lens 16x, 0.8NA | Nikon | CF175 | Microscope |
| Oil-based modeling clay | Ly Hsin Clay | C4086 | Surgery: head bar holder |
| Optical adhesive | Norland Products | NOA68 | Surgery: UV curable glue |
| Photomultiplier tube | Hamamatsu | H11706P-40 | Microscope |
| Piezo actuator | Physik Instrumente | P-725.4CA PIFOC | Microscope |
| Pockels Cell | Conoptics | M350-80-LA-BK-02 | Microscope |
| Red Wratten filter (> 600 nm) | Edmund optics | #53-699 | present visual stimulus |
| Resonant-Galvo Scan System | INSS | RGE-02 | Microscope |
| Right-Angle Clamp for Ø1/2" Post | ThorLabs | RA90/M | Surgery: fish loading module |
| Rotating Clamp for Ø1/2" Post | ThorLabs | SWC/M | Surgery: fish loading module |
| ScanImage | MBF Bioscience | Basic version | Microscope |
| Semi-hexagonal tank | custom made | see supplemental files | recording chamber |
| Super-Bond C&B Kit | Sun Medical Co. | Super-Bond C&B | Surgery: dental cement |
| Tricaine methanesulfonate | Sigma Aldrich | E10521 | Surgery: anesthetic |
| USB Camera | FLIR | BFS-U3-13Y3M-C | Behavior recording |
| Vetbond | 3M | 1469SB | Surgery: tissue glue |
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