Davranan Yetişkin Zebra Balıklarında Ön Beyin Aktivitesinin İki Fotonlu Kalsiyum Görüntülemesi

Burada, yetişkin zebra balıklarının dorsal ön beyninde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme yapmak için bir protokol sunuyoruz.

Yetişkin zebra balığı (Danio rerio) bilişsel işlevleri incelemek için zengin bir davranış repertuarı sergiler. Ayrıca, optik görüntüleme yöntemleriyle beyin bölgelerindeki aktiviteleri ölçmek için kullanılabilecek minyatür bir beyne sahiptirler. Bununla birlikte, yetişkin zebra balıklarında beyin aktivitesinin kaydedilmesine ilişkin raporlar azdır. Bu çalışma, yetişkin zebra balıklarının dorsal ön beyninde iki fotonlu kalsiyum görüntüleme gerçekleştirme prosedürlerini açıklamaktadır. Yetişkin zebra balıklarının başlarını hareket ettirmesini engellemeye yönelik adımlara odaklanıyoruz, bu da beyin aktivitesinin lazerle taranarak görüntülenmesini sağlayan stabilite sağlıyor. Kafası kısıtlanmış hayvanlar, vücut kısımlarını serbestçe hareket ettirebilir ve yardım almadan nefes alabilir. Prosedür, baş desteği ameliyatının süresini kısaltmayı, beyin hareketini en aza indirmeyi ve kaydedilen nöron sayısını en üst düzeye çıkarmayı amaçlamaktadır. Kalsiyum görüntüleme sırasında sürükleyici bir görsel ortam sunmak için bir kurulum da burada açıklanmıştır ve bu, görsel olarak tetiklenen davranışların altında yatan nöral bağıntıları incelemek için kullanılabilir.

Genetik olarak kodlanmış göstergeler veya sentetik boyalarla kalsiyum floresan görüntüleme, insan olmayan primatlar, kemirgenler, kuşlar ve böcekler dahil olmak üzere davranan hayvanlarda nöronal aktiviteyi ölçmek için güçlü bir yöntem olmuştur¹. Beyin yüzeyinin yaklaşık 800 μm altına kadar yüzlerce hücrenin aktivitesi, çoklu foton görüntüleme ^2,3 kullanılarak aynı anda ölçülebilir. Spesifik hücre tiplerinin aktivitesi, genetik olarak tanımlanmış nöronal popülasyonlarda kalsiyum göstergelerinin eksprese edilmesiyle de ölçülebilir. Küçük omurgalı modelleri için görüntüleme yönteminin uyg....

Tüm hayvan prosedürleri, Academia Sinica Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi'nin yönergelerine uygun olarak onaylanmış ve gerçekleştirilmiştir. Araştırma araçlarının ayrıntıları Malzeme Tablosunda bulunabilir.

1. Kayıt odasının hazırlanması

1. Yarı altıgen bir tank, bir taban plakası ve bir kafa aşaması hazırlayın (Şekil 1A; Ek Dosyalar 1-3). Baş aşaması, dairese.......

Protokol iki bölümden oluşur: baş desteği cerrahisi ve ön beyindeki nöronal aktivitelerin iki fotonlu kalsiyum görüntülemesi. Ameliyatın başarısı, hayvanın hayatta kalması ve baş desteğinin stabilitesi ile tanımlanır. Hayatta kalma oranı, ameliyat sırasında ağızdan% 0.01 TMS çözeltisinin sık sık perfüzyonu ile büyük ölçüde iyileştirilebilir. Balıklar anesteziden kurtulmalı ve akvaryum suyuna daldırıldıktan sonra 1-2 dakika içinde aktif olarak nefes almalıdır. İki fotonlu kalsi.......

Burada, iki fotonlu kalsiyum görüntüleme için yetişkin zebra balığının kafasını dizginlemek için ayrıntılı bir protokol açıklıyoruz. Lazer tarama görüntüleme için yeterince stabil bir koltuk başlığı elde etmek için iki kritik adım vardır. İlk olarak, kafa çubuğu kafataslarının belirli bağlantı yerlerine yapıştırılmalıdır. Kafatasının diğer kısımları genellikle mekanik stabilite sağlamak için çok incedir ve hatta güçlü vücut hareketleri sırasında kırılabilir. İki.......

Bu çalışma, Sinica Akademisi Moleküler Biyoloji Enstitüsü ve Tayvan Ulusal Bilim ve Teknoloji Konseyi tarafından desteklenmiştir. Fizik Enstitüsü'ndeki Makine Atölyesi, Academia Sinica, özel tasarım parçaların üretilmesine yardımcı oldu. Ayrıca P. Argast'a (Friedrich Miescher Biyomedikal Araştırma Enstitüsü, Basel, İsviçre) kafa aşamasının hızlı kilit mekanizmasının tasarımı için teşekkür etmek istiyoruz.