Miglioramento dell'affidabilità della biobanca dei tumori alla prostata con una migliore tecnica di campionamento e caratterizzazione istologica

Summary

Questo protocollo descrive un metodo per facilitare la raccolta di campioni da campioni di prostatectomia radicale. L'obiettivo è quello di mappare, caratterizzare e sezionare con micro-macro campioni di tessuto dai campioni in base a criteri anatomopatologici prima di conservarli in una biobanca.

Abstract

L'acquisizione di campioni di tessuto tumorale freschi e ben caratterizzati è fondamentale per condurre studi "omici" di alta qualità. Tuttavia, può essere particolarmente impegnativo nel contesto del cancro alla prostata (PC) a causa della natura unica di questo organo e dell'elevata eterogeneità associata a questo tumore. D'altra parte, anche caratterizzare istopatologicamente i campioni prima della loro conservazione senza causare alterazioni tissutali significative è una sfida intrigante. In questo contesto, presentiamo un nuovo metodo per l'acquisizione, la mappatura, la caratterizzazione e la micro-dissezione del tessuto prostatico resecato basato su criteri anatomopatologici.

A differenza dei protocolli pubblicati in precedenza, questo metodo riduce il tempo necessario per l'analisi istopatologica del campione prostatico senza comprometterne la struttura, che è fondamentale per la valutazione dei margini chirurgici. Inoltre, consente la delineazione e la dissezione micro-macro di campioni di tessuto prostatico fresco, con particolare attenzione alle aree tumorali istologiche definite da criteri patologici come il punteggio di Gleason, le lesioni precursori (neoplasia intraepiteliale prostatica di alto grado - PIN) e le lesioni infiammatorie (prostatite). Questi campioni vengono poi conservati in una Biobanca per successive analisi di ricerca.

Introduction

Il cancro alla prostata (PC) è il 2^° tumore più frequente negli uomini e la 5^° causa di morte in tutto il mondo¹. Il trattamento e la prognosi del paziente dipendono dalla stadiazione e dal grado (punteggio di Gleason) del tumore, come evidenziato dai tassi di sopravvivenza a 5 anni più elevati dei tumori localizzati e di basso grado (grado 6 di Gleason) (99%) rispetto ai tumori di Gleason di alto grado e metastatici (31%)².

La recidiva locale di PC e il fallimento del trattamento sono stati collegati alla caratteristica elevata eterogeneità genetica intratumorale di ques....

Protocol

Questo metodo è stato sviluppato attraverso sforzi collaborativi che hanno coinvolto diversi servizi clinici (Urologia, Patologia e Biobanca dell'Ospedale La Fe). Lo studio è stato condotto in conformità con le linee guida istituzionali, nazionali e internazionali per il benessere umano e ha ricevuto l'approvazione dal Comitato Etico per la Ricerca Biomedica presso l'Instituto de Investigación Sanitaria Hospital Universitario y Politécnico La Fe (Valencia, Spagna). Tutti i campioni sono stati conservati presso la Bi.......

Discussion

In qualsiasi studio di ricerca, l'ottenimento di campioni di qualità è un requisito essenziale per ridurre le distorsioni sistematiche e ottenere risultati affidabili²². Pertanto, il controllo di variabili preanalitiche come la temperatura alla quale i campioni vengono processati e conservati, il tempo trascorso dalla raccolta del campione alla conservazione, l'uso di materiali sterilizzati o gli effetti che l'aggiunta di conservanti o altri additivi può avere sui campioni deve essere considera.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Cadiere forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471049. 18 uses.
Conventional slides	Knittel Glass	2021	Ground/ Frosted end
Cryostat microtome	Thermo Fisher Scientific	---	Criostato CryoStar NX50
Cryotubes	Greiner Bio-One GmbH	Ref.: 122280.	CRYO S. PP, with screw cap, sterile.
Da Vinci surgical system	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	XI model
Dissection instruments	Bayer	---	Two tweezers and a surgical blade
DPX Eukitt	Medizin- und Labortechnik GmbH	6.00.01.0001.06.01.01
Eosin	Agilent	157252
Fenestrated bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471205. 14 lives.
Force bipolar	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471405. 12 uses.
Freezers	Thermo Scientific		MODEL 907. -80 ºC
Hematoxylin	Agilent	157251
Inmunohistochemistry Slides	Agilent-Dako	K802021-2
Large needle driver	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471006. 15 uses.
Maryland bipolar forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471172. 14 uses.
Microscope	Olympus	---	Olympus cx40
Microtome blades	PFM Medical	a35
Monopolar curved scissors	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 470179. 10 uses.
OCT compound	NEG-50	LOT.117340
PlusSpeed S Single-use Biopsy Device with beveled tip	Peter Pflugbeil GmbH	PSS-1825-S
ProGasp forceps	Intuitive	PN1052082-US 10/2021	Part number: 471093. 18 uses.
Sample holder Disc	Davidson Cryo Chuck. BradleyProducts		30 mm
Tissue ink	Pelikan	2021	Ink 4001 brilliant black (301168)
Xylol	Quimipur	Ref. 169