פלטפורמה לזיהוי כמותי של תאי מערכת החיסון ברירית הרחם על בסיס אימונוהיסטוכימיה וניתוח תמונה דיגיטלית

Summary

כאן, פותחה ואומתה פלטפורמת ניתוח תמונה אימונוהיסטוכימית דיגיטלית לניתוח כמותי של תאי החיסון של רירית הרחם של חולים עם הפלות חוזרות בחלון ההשתלה.

Abstract

כדי להעריך את המיקרו-סביבה החיסונית של רירית הרחם של חולים עם הפלות חוזרות (RM), פותחה ואומתה פלטפורמת ניתוח תמונה דיגיטלית של אימונוהיסטוכימיה כדי לנתח כמותית תאים חיסוניים של רירית הרחם במהלך השלב האמצעי-לוטאלי. כל דגימות רירית הרחם נאספו במהלך השלב האמצעי-לוטאלי של המחזור החודשי. רקמות רירית הרחם המשובצות בפרפין חולקו לשקופיות בעובי 4 מיקרומטר, וצביעה אימונוהיסטוכימית (IHC) בוצעה לאיתור תאים חיסוניים של רירית הרחם, כולל תאי CD56+ uNK, Foxp3+ Tregs, מקרופאגים CD163+ M2, DCs CD1a+ ותאי T CD8+. השקופיות הפנורמיות נסרקו באמצעות סורק שקופיות דיגיטלי ומערכת ניתוח תמונות מסחרית שימשה לניתוח כמותי. אחוז תאי מערכת החיסון של רירית הרחם חושב על ידי חלוקת מספר תאי החיסון בסך תאי רירית הרחם. באמצעות מערכת ניתוח התמונה המסחרית, הערכה כמותית של תאי מערכת החיסון של רירית הרחם, שקשה או בלתי אפשרי לנתח באמצעות ניתוח תמונה קונבנציונלי, יכולה להיות מנותחת בקלות ובמדויק. מתודולוגיה זו יכולה להיות מיושמת כדי לאפיין כמותית את המיקרו-סביבה של רירית הרחם, כולל אינטראקציה בין תאים חיסוניים, ואת ההטרוגניות שלה עבור חולים שונים באי ספיקת רבייה. הפלטפורמה להערכה כמותית של תאי מערכת החיסון של רירית הרחם עשויה להיות בעלת משמעות קלינית חשובה לאבחון וטיפול בחולי RM.

Introduction

הפלה חוזרת (RM) היא אובדן של שני הריונות רצופים או יותר והיא מחלה מורכבת המושכת תשומת לב מצד רופאים בשנים האחרונות. שיעור ההיארעות של RM בנשים בגיל הפוריות הוא 1%-5% ¹. תוצאות מחקרים קודמים מראות כי גורמים חיסוניים קשורים קשר הדוק עם הפתוגנזה של RM 2,3,4,5. שמירה על הומאוסטזיס חיסוני בממשק האם-עובר נדרשת להשתלת עובר והתפתחותו. תאי חיסון רירית הרחם מבצעים מספר תפקידי ויסות לשמירה על הומאוסטזיס זה, כגון קידום פלישת טרופובלסט, עיצוב מחדש של עורקים ספירליים ותרומה להתפתחות שליה 6,7,8,9.<....

Protocol

תוכן המחקר והפרוטוקול נבדקו באופן אתי ואושרו על ידי ועדת האתיקה של המחקר של בית החולים האורולוגי שנג'ן ז'ונגשאן. כל הנשים (בגילאי 20-40) שהשתתפו במחקר סיפקו הסכמה מדעת לאיסוף הדגימות ולשימושן.

1. רכישת רקמה פתולוגית

1. הכינו את הכלים לקצירת רקמות, כלומר סרגל מדידה, ט?.......

Discussion

פרוטוקול זה הקים פלטפורמת ניתוח תמונה דיגיטלית של אימונוהיסטוכימיה לניתוח כמותי של תאי חיסון רירית הרחם של חולי RM. כאן, שישה סמנים חיסוניים רירית הרחם זוהו כדי להעריך את microenvironment החיסון רירית הרחם בחולי RM.

רירית הרחם הפתוחה בשלב האמצעי-לוטאלי היא המפתח להשתרשות מוצלחות ולה.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Automated coverslipper	Sakuraus	DRS-Prisma-P-JCS&Film-JC2
CD163	GrowGn Biotechnology	NCL-L-CD163
CD1a	Gene Tech	GM357129
CD56	Gene Tech	GT200529
CD8	Novocastra	NCL-L-CD8-4B11
Dehydrator	Thermo Fisher	Excelsior ES
Digital pathology and	Indica labs	HALO
Foxp3	YILIFANG biological	14-477-82
IHC stainer	Leica	BOND III
Image analysis platform	Indica labs	HALO
Slide Scanner	Olympus life science	VS200