Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

הפרוטוקול מציג שיטה לא פולשנית לאבחון מהיר של זיהומי קיבה של הליקובקטר פילורי באמצעות בדיקת מיתרים וקובע את עמידותו האנטיביוטית לקלריתרומיצין ולבופלוקסצין באמצעות תגובת שרשרת כמותית של פולימראז (qPCR).

Abstract

הליקובקטר פילורי הוא פתוגן אנושי עיקרי המדביק כמחצית מאוכלוסיית העולם והופך לאיום בריאותי חמור בשל עמידותו הגוברת לאנטיביוטיקה. זהו הגורם הסיבתי של דלקת גסטריטיס פעילה כרונית, מחלת כיב פפטי וסרטן קיבה והוא סווג כמסרטן מקבוצה I על ידי הסוכנות הבינלאומית לחקר הסרטן. לכן, האבחון המהיר והמדויק של H. pylori וקביעת עמידותו לאנטיביוטיקה חשובים למיגור יעיל של פתוגן חיידקי זה. כיום, שיטות האבחון של H. pylori כוללות בעיקר את בדיקת הנשימה אוריאה (UBT), בדיקת האנטיגן, בדיקת נוגדנים בסרום, גסטרוסקופיה, בדיקת אוראז מהיר (RUT) ותרבית חיידקים. ביניהן, שלוש שיטות הגילוי הראשונות אינן פולשניות, כלומר הן בדיקות קלות לביצוע. עם זאת, לא ניתן לאחזר חיידקים באמצעות טכניקות אלה; לפיכך, לא ניתן לבצע בדיקות עמידות לתרופות. שלוש האחרונות הן בדיקות פולשניות, אך הן יקרות, דורשות מיומנויות גבוהות ויש להן פוטנציאל לגרום נזק לחולים. לכן, שיטה לא פולשנית, מהירה וסימולטנית לזיהוי H . pylori ובדיקת עמידות לתרופות חשובה מאוד למיגור יעיל של H. pylori בפרקטיקה הקלינית. פרוטוקול זה נועד להציג הליך ספציפי הכולל את בדיקת המיתרים בשילוב עם תגובת שרשרת כמותית של פולימראז (qPCR) לזיהוי מהיר של זיהום H. pylori ועמידות לאנטיביוטיקה. בניגוד לתרביות חיידקים, שיטה זו מאפשרת אבחון קל, מהיר ולא פולשני של מצב זיהום הליקובקטר פילורי ועמידות לתרופות. באופן ספציפי, השתמשנו ב-qPCR כדי לזהות rea עבור זיהום H. pylori ומוטציות בגנים 23S rRNA ו-gyrA , אשר מקודדים עמידות נגד clarithromycin ו-levofloxacin, בהתאמה. בהשוואה לטכניקות גידול שגרתיות, פרוטוקול זה מספק טכניקה לא פולשנית, בעלות נמוכה וחוסכת זמן כדי לזהות זיהום H. pylori ולקבוע את עמידותו לאנטיביוטיקה באמצעות qPCR.

Introduction

H. pylori הוא חיידק בצורת ספירלה, תנועתי מאוד, גראם-שלילי שחי בעיקר באזור הפילורוס של הקיבה1. זהו פתוגן נפוץ שמדביק כמעט 50% מאוכלוסיית העולם2. לרוב האנשים עם זיהום H. pylori אין ביטויים קליניים, ורובם מפתחים מחלות שונות לאחר מספר שנים של זיהום, כולל דלקת קיבה כרונית, כיבים פפטיים, כיבי קיבה וסרטן קיבה3. במספר מחקרים המבוססים על אוכלוסיות שונות,הודגמה יעילות סילוק H. pylori למניעת סרטן הקיבה ונגעים טרום סרטניים 4,5. לכן, ארגון הבריאות העולמי (WHO) הסוכנות הבינלאומית לחקר הסרטן המליצה על מיגור H. pylori כ....

Protocol

המחקר הנוכחי נערך בהתאם לשיקולים אתיים שנקבעו על ידי הוועדה האתית של בית החולים העממי המחוזי גואנגדונג, האוניברסיטה הרפואית הדרומית, גואנגג'ואו, סין (מספר אישור: KY-Q-2022-384-02). חולים בטווח הגילאים 18-60 נכללו במחקר זה. חולים הנוטלים אנטיביוטיקה, תרופות סיניות אנטיבקטריאליות, תרופות כגון מעכבי מ?.......

Representative Results

זיהוי זיהום H. pylori ועמידות לאנטיביוטיקה בנוזל הקיבה על ידי qPCR
ביצענו qPCR לזיהוי זיהום בהליקובקטר פילורי על-ידי הגברת הגן אורייא, וקבענו את פרופיל העמידות שלו לאנטיביוטיקה על-ידי מיקוד מוטציות נקודתיות בגן rRNA 23S ובגן gyrA (טבלה 1). ערכי בקרת האיכות של CT בכל.......

Discussion

זיהוי H. pylori יכול להתבצע בשיטות פולשניות ולא פולשניות13. טכניקות פולשניות נפוצות כגון היסטופתולוגיה, בדיקת אוראז מהירה, תגובת שרשרת פולימראז (PCR) ותרבית חיידקים דורשות אנדוסקופיה וביופסיה. בדיקות סרולוגיות, בדיקות נשימה של אוריאה ובדיקות אימונוסורבנטיות מקושרות אנזימים (.......

Acknowledgements

עבודה זו נתמכה על ידי פרויקט Sanming של רפואה בשנג'ן (מענק מס '. SZSM201510050) וקרן המחקר הבסיסי והיישומי של גואנגדונג (מענק מס' 2022A1515220023). קרן המחקר לכישרונות מתקדמים של בית החולים העממי המחוזי גואנדונג (לא. KJ012021097), והקרן הלאומית למדעי הטבע של סין (81871734, 82072380, 82272423). למממנים לא היה כל תפקיד בעיצוב המחקר, באיסוף הנתונים ובניתוחם, בהחלטה לפרסם או בהכנת כתב היד.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
23S rRNA and gyrA gene point mutations detection kit (PCR-Fluorescence Probing)Hongmed InfagenDetection of Helicobacter pylori resistance to clarithromycin and levofloxacin
ABI 7500 fluorescence quantitative PCR machineThermo Fisher ScientificSEDA 20163220767Fluorescent quantitative PCR amplification
ABI 7500 softwareThermo Fisher ScientificData Analysis
BSC-1500IIA2-XBIOBASESEDA 20143222263Biosafety cabinet
DNA extraction kitDaan Gene 
E-CentrifugeWEALTECCentrifuge the residual liquid off the wall of the tube.
H. Pylori DNA detection kit (PCR-Fluorescence Probing) Hongmed InfagenTesting for H. pylori infection
Stream SP96 automated nucleic acid extractorDaan GeneSEDA 20140104For DNA extraction 
String test kitHongmed InfagenIt contains a capsule attached to a string, scissors, cotton swab, and sample preservation tube 
Ultra-low temperature freezers (DW-YL450) MELINGSEDA 20172220091-20 °C for storing reagents 
Vortex-5Kylin-bellFor mixing reagent 

References

  1. Proença-Modena, J. L., Acrani, G. O., Brocchi, M. Helicobacter pylori: Phenotypes, genotypes and virulence genes. Future Microbiology. 4 (2), 223-240 (2009).
  2. Hussein, R. A., Al-Ouqaili, M. T. S., Majeed, Y. H.

Explore More Articles

197qPCR

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved