Diagnóstico Rápido Baseado na Reação em Cadeia da Polimerase Quantitativa (qPCR) da Infecção por Helicobacter pylori e Resistência a Antibióticos

O Helicobacter pylori é um importante patógeno humano que infecta aproximadamente metade da população mundial e está se tornando uma séria ameaça à saúde devido à sua crescente resistência aos antibióticos. É o agente causador de gastrite crônica ativa, úlcera péptica e câncer gástrico e foi classificado como carcinógeno do Grupo I pela Agência Internacional de Pesquisa em Câncer. Portanto, o diagnóstico rápido e preciso do H. pylori e a determinação de sua resistência a antibióticos são importantes para a erradicação eficiente desse patógeno bacteriano. Atualmente, os métodos de diagnóstico do H. pylori incluem principalmente o teste respiratório da ureia (UBT), o teste de antígeno, o teste de anticorpos séricos, a gastroscopia, o teste rápido da urease (RUT) e a cultura bacteriana. Dentre eles, os três primeiros métodos de detecção são não invasivos, ou seja, são testes de fácil realização. No entanto, as bactérias não podem ser recuperadas através dessas técnicas; portanto, o teste de resistência a drogas não pode ser realizado. Os três últimos são exames invasivos, mas são caros, exigem alta habilidade e têm o potencial de causar danos aos pacientes. Portanto, um método não invasivo, rápido e simultâneo para detecção de H. pylori e teste de resistência a drogas é muito importante para a erradicação eficiente do H. pylori na prática clínica . Este protocolo tem como objetivo apresentar um procedimento específico envolvendo o teste de cordas em combinação com a reação em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) para a rápida detecção da infecção por H. pylori e resistência a antibióticos. Ao contrário das culturas bacterianas, este método permite o diagnóstico fácil, rápido e não invasivo do estado de infecção por H. pylori e resistência aos medicamentos. Especificamente, usamos qPCR para detectar rea para infecção por H. pylori e mutações nos genes 23S rRNA e gyrA , que codificam resistência contra claritromicina e levofloxacina, respectivamente. Comparado às técnicas de cultivo rotineiramente utilizadas, este protocolo fornece uma técnica não invasiva, de baixo custo e economia de tempo para detectar a infecção por H. pylori e determinar sua resistência a antibióticos usando qPCR.