Fabrication of Monolayer Graphene-Coated Grids for Cryoelectron Microscopy(초저온 전자 현미경을 위한 단층 그래핀 코팅 그리드 제작)

극저온 전자 현미경(cryoEM)은 고분자 복합체의 원자 구조를 조사하기 위한 강력한 기술로 부상했습니다. CryoEM을 위한 시료 전처리는 일반적으로 천공된 지지 필름의 구멍 내에 부유하는 유리질 얼음의 얇은 층에 검체를 보존해야 합니다. 그러나 CryoEM 연구에 일반적으로 사용되는 모든 시료 전처리 접근법은 시편을 공기-물 계면에 노출시켜 시료에 강한 소수성 효과를 발생시켜 종종 변성, 응집 및 복잡한 해리를 초래합니다. 또한, 시료의 영역과 공기-물 계면 사이의 바람직한 소수성 상호 작용은 거대분자가 채택한 방향에 영향을 미쳐 이방성 방향 분해능으로 3D 재구성을 가능하게 합니다.

CryoEM 표본을 그래핀 단층에 흡착하면 배경 노이즈의 유입을 최소화하면서 공기-물 계면과의 상호 작용을 완화하는 데 도움이 되는 것으로 나타났습니다. 그래핀 지지체는 또한 CryoEM 이미징에 필요한 단백질 농도를 크게 낮추는 이점을 제공합니다. 이러한 지지대의 장점에도 불구하고 그래핀 코팅 그리드는 상업적 옵션의 엄청난 비용과 대규모 자체 생산과 관련된 문제로 인해 CryoEM 커뮤니티에서 널리 사용되지 않습니다. 이 논문은 단층 그래핀을 거의 완전히 커버하는 CryoEM 그리드 배치를 준비하는 효율적인 방법을 설명합니다.