Sign In

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

כאן נקבע הליך להפקת DNA נטול תאים מהומור זגוגי ומימי לביצוע מחקרים מולקולריים לאבחון לימפומה זגוגית. השיטה מציעה את היכולת לחלץ במקביל DNA מהמרכיב התאי של הדגימה או לשמור אותו לבדיקות נלוות.

Abstract

לימפומה זגוגית (VRL) מייצגת לימפומה אגרסיבית, המסווגת לעתים קרובות כלימפומה ראשונית של מערכת העצבים המרכזית המפזרת תאי B גדולים. כדי לאבחן VRL, דגימות כגון הומור זגוגית, ולאחרונה, הומור מימי נאספים. בדיקות אבחון VRL על דגימות אלה כוללות ציטולוגיה, ציטומטריית זרימה ובדיקות מולקולריות. עם זאת, הן ציטופתולוגיה והן ציטומטריית זרימה, יחד עם בדיקות מולקולריות באמצעות DNA תאי, מחייבות תאים שלמים שלמים. האתגר טמון בעובדה שלהומור זגוגי ומימי יש בדרך כלל תאיות נמוכה, ותאים רבים נהרסים במהלך האיסוף, האחסון והעיבוד. יתר על כן, דגימות אלה מציבות קשיים נוספים לבדיקה מולקולרית בשל הצמיגות הגבוהה של הומור הזגוגית והנפח הנמוך של הומור הזגוגית והמימית כאחד. מחקר זה מציע שיטה לחילוץ דנ"א נטול תאים מדגימות זגוגיות ומימיות. גישה זו משלימה את מיצוי הדנ"א התאי או מאפשרת להשתמש במרכיב התאי של דגימות אלה לשיטות אבחון אחרות, כולל ציטולוגיה וציטומטריית זרימה.

Introduction

לימפומה זגוגית (VRL) היא לימפומה אגרסיבית הקשורה ללימפומה ראשונית של מערכת העצבים המרכזית, מפושטת של תאי B גדולים 1,2,3. VRL הוא בדרך כלל קטלני בשל מעורבותו במערכת העצבים המרכזית 1,2. למרות נדיר1,4, VRL לעתים קרובות מציג סימפטומים דומים uveitis האחורי ומחלות זגוגית אחרות 4,5. כתוצאה מכך, חולים המציגים תסמיני אובאיטיס דורשים אבחנה כדי לאשר או לשלול VRL.

לאחרונה פורסמו קריטריו....

Protocol

הפרוטוקול הנוכחי עוקב אחר הנחיות הטיפול האנושי ובאישור מועצת הביקורת המוסדית (IRB) של אוניברסיטת מישיגן. ויתור על הסכמה מדעת התקבל לכך מ-IRB. אין קריטריוני הכללה או הדרה רלוונטיים עבור המטופלים המעורבים.

1. הפרדת רכיבים סלולריים ורכיבים נטולי תאים

הערה: ?.......

Representative Results

שיטות מיצוי אלה בוצעו במספר מצומצם של מקרים כדי להבטיח תפוקה נאותה והגברה של DNA ללא תאים בהשוואה לדנ"א תאי מדגימות הזגוגית (ארבע) והמימית (ארבע). מדגימות אלה, תפוקת הדנ"א מהרכיב נטול התאים של נוזלים אלה דומה לזו של הרכיב התאי (טבלה 1). תאים ו- cfDNA מדגימות אלה הוערכו גם באמצעות בדיקות מו?.......

Discussion

לימפומה זגוגית (VRL) היא לימפומה אגרסיבית של תאי B גדולים 1,2,3 שתסמיניה יכולים לחקות מחלות זגוגיות אחרות 4,5. בדיקה מולקולרית של זגוגית, ולאחרונה גם הומור מימי, הפכה לשיטה קריטית לאבחנה של VRL או לשלילתה. עם זאת, נ?.......

Acknowledgements

טימותי דניאלס, MLS(ASCP), MB, QLS, והלמוט וייגלין, MLS (ASCP) סייעו בביסוס שיטת מיצוי זו במעבדה שלנו.

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
2-Propanol (Isopropanol)FischerA415-500
DNA Clean & Concentrator-10Zymo ResearchD4011
DNA Clean & Concentrator-5Zymo ResearchD4003
Gentra Puregene Cell Lysis SolutionQiagen158906
Gentra Puregene DNA Hydration SolutionQiagen158916
Gentra Puregene Protein Precipitation SolutionQiagen158912
Phosphate Buffered Saline (PBS)SigmaP-4417
Quick-DNA Urine KitZymo ResearchD3061Conditioning buffer; also includes clearing beads, Proteinase K and spin columns
Ultrapure Glycogen, 20 µg/µL (20 mg/mL)Thermo Fisher/Invitrogen10814010

References

Explore More Articles

JoVE203

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Privacy

Terms of Use

Policies

Research

Education

ABOUT JoVE

Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved