A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
כאן נקבע הליך להפקת DNA נטול תאים מהומור זגוגי ומימי לביצוע מחקרים מולקולריים לאבחון לימפומה זגוגית. השיטה מציעה את היכולת לחלץ במקביל DNA מהמרכיב התאי של הדגימה או לשמור אותו לבדיקות נלוות.
לימפומה זגוגית (VRL) מייצגת לימפומה אגרסיבית, המסווגת לעתים קרובות כלימפומה ראשונית של מערכת העצבים המרכזית המפזרת תאי B גדולים. כדי לאבחן VRL, דגימות כגון הומור זגוגית, ולאחרונה, הומור מימי נאספים. בדיקות אבחון VRL על דגימות אלה כוללות ציטולוגיה, ציטומטריית זרימה ובדיקות מולקולריות. עם זאת, הן ציטופתולוגיה והן ציטומטריית זרימה, יחד עם בדיקות מולקולריות באמצעות DNA תאי, מחייבות תאים שלמים שלמים. האתגר טמון בעובדה שלהומור זגוגי ומימי יש בדרך כלל תאיות נמוכה, ותאים רבים נהרסים במהלך האיסוף, האחסון והעיבוד. יתר על כן, דגימות אלה מציבות קשיים נוספים לבדיקה מולקולרית בשל הצמיגות הגבוהה של הומור הזגוגית והנפח הנמוך של הומור הזגוגית והמימית כאחד. מחקר זה מציע שיטה לחילוץ דנ"א נטול תאים מדגימות זגוגיות ומימיות. גישה זו משלימה את מיצוי הדנ"א התאי או מאפשרת להשתמש במרכיב התאי של דגימות אלה לשיטות אבחון אחרות, כולל ציטולוגיה וציטומטריית זרימה.
לימפומה זגוגית (VRL) היא לימפומה אגרסיבית הקשורה ללימפומה ראשונית של מערכת העצבים המרכזית, מפושטת של תאי B גדולים 1,2,3. VRL הוא בדרך כלל קטלני בשל מעורבותו במערכת העצבים המרכזית 1,2. למרות נדיר1,4, VRL לעתים קרובות מציג סימפטומים דומים uveitis האחורי ומחלות זגוגית אחרות 4,5. כתוצאה מכך, חולים המציגים תסמיני אובאיטיס דורשים אבחנה כדי לאשר או לשלול VRL.
לאחרונה פורסמו קריטריו....
הפרוטוקול הנוכחי עוקב אחר הנחיות הטיפול האנושי ובאישור מועצת הביקורת המוסדית (IRB) של אוניברסיטת מישיגן. ויתור על הסכמה מדעת התקבל לכך מ-IRB. אין קריטריוני הכללה או הדרה רלוונטיים עבור המטופלים המעורבים.
1. הפרדת רכיבים סלולריים ורכיבים נטולי תאים
הערה: ?.......
שיטות מיצוי אלה בוצעו במספר מצומצם של מקרים כדי להבטיח תפוקה נאותה והגברה של DNA ללא תאים בהשוואה לדנ"א תאי מדגימות הזגוגית (ארבע) והמימית (ארבע). מדגימות אלה, תפוקת הדנ"א מהרכיב נטול התאים של נוזלים אלה דומה לזו של הרכיב התאי (טבלה 1). תאים ו- cfDNA מדגימות אלה הוערכו גם באמצעות בדיקות מו?.......
לימפומה זגוגית (VRL) היא לימפומה אגרסיבית של תאי B גדולים 1,2,3 שתסמיניה יכולים לחקות מחלות זגוגיות אחרות 4,5. בדיקה מולקולרית של זגוגית, ולאחרונה גם הומור מימי, הפכה לשיטה קריטית לאבחנה של VRL או לשלילתה. עם זאת, נ?.......
טימותי דניאלס, MLS(ASCP), MB, QLS, והלמוט וייגלין, MLS (ASCP) סייעו בביסוס שיטת מיצוי זו במעבדה שלנו.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
2-Propanol (Isopropanol) | Fischer | A415-500 | |
DNA Clean & Concentrator-10 | Zymo Research | D4011 | |
DNA Clean & Concentrator-5 | Zymo Research | D4003 | |
Gentra Puregene Cell Lysis Solution | Qiagen | 158906 | |
Gentra Puregene DNA Hydration Solution | Qiagen | 158916 | |
Gentra Puregene Protein Precipitation Solution | Qiagen | 158912 | |
Phosphate Buffered Saline (PBS) | Sigma | P-4417 | |
Quick-DNA Urine Kit | Zymo Research | D3061 | Conditioning buffer; also includes clearing beads, Proteinase K and spin columns |
Ultrapure Glycogen, 20 µg/µL (20 mg/mL) | Thermo Fisher/Invitrogen | 10814010 |
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved