A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
* These authors contributed equally
Протокол разъясняет две различные методики децеллюляризации, применяемые к нативным легочным тканям крупного рогатого скота, обеспечивая всестороннее описание их соответствующих характеристик.
Использование гидрогелей, полученных из внеклеточного матрикса (ECM), в тканевой инженерии становится все более популярным, поскольку они могут имитировать естественную среду клеток in vitro. Тем не менее, поддержание нативного биохимического состава ВКМ, достижение механической стабильности и понимание влияния процесса децеллюляризации на механические свойства гидрогелей ВКМ являются сложной задачей. Описан трубопровод для децеллюляризации легочной ткани крупного рогатого скота с использованием двух различных протоколов, последующая характеристика эффективности децеллюляризации, изготовление восстановленных децеллюляризованных гидрогелей ВКМ легких и оценка их механических и цитосовместимых свойств. Децеллюляризацию легкого крупного рогатого скота проводили физическим (циклы замораживания-оттаивания) или химическим (на основе моющих средств) методом. Окрашивание гематоксилином и эозином проводили для подтверждения децеллюляризации и удержания основных компонентов ВКМ. Для оценки содержания остаточного коллагена и сульфатного гликозаминогликана (sGAG) в децеллюляризованных образцах использовали методы окрашивания Sirius red и Alcian Blue соответственно. Механические свойства децеллюляризованных гидрогелей ВКМ легких характеризовались колебательной реологией. Полученные результаты свидетельствуют о том, что децеллюляризованные гидрогели для легких крупного рогатого скота могут стать надежной органотипической альтернативой коммерческим продуктам ECM, сохраняя большинство нативных компонентов ECM. Кроме того, эти результаты показывают, что выбранный метод децеллюляризации существенно влияет на кинетику гелеобразования, а также на жесткость и вязкоупругие свойства получаемых гидрогелей.
Традиционные монослойные условия культивирования не обеспечивают точного представления нативного тканевого микроокружения и не имеют возможности обеспечить трехмерный (3D) каркас с информативными лигандами, которые обеспечивают взаимодействие между клеткой и матрицей и клеткой между клетками1. Состав и механические свойства внеклеточного матрикса (ВКМ) сильно тканеспецифичны, зависят от времени и претерпевают изменения при патологических состояниях. Поэтому существует потребность в биомиметических 3D-моделях тканей, которые позволяют настраивать такие характеристики, модулировать клеточное поведение и достигать желаемой функциональности тканей.....
Свежие нативные легкие от молодых (1-2 года) доноров крупного рогатого скота были получены с местной скотобойни и доставлены в герметичном пластиковом контейнере на льду в лабораторию. Жертвоприношение животных проводится для общего потребления мяса (легкие выбрасываются как отходы) и .......
Децеллюляризация
Децеллюляризация легочной ткани крупного рогатого скота с получением гидрогелей dECM, воспроизводящих нативное микроокружение легких, была достигнута как физическими (замораживание-оттаивание), так и химическими (Triton-X-100) методами. После вскрытия кусочки тк?.......
Гидрогели органного происхождения стали многообещающими моделями, которые повторяют нативную ткань ECM и имитируют органотипическую клеточную функцию. Несмотря на то, что децеллюляризованная ВКМ легких часто используется в тканевой инженерии, тщательная характеристика состава и мех?.......
Эта работа была профинансирована Советом по научным и технологическим исследованиям Турции (TÜBİTAK) (грант No 118C238). Вся ответственность за публикацию/статью лежит на владельце публикации. Финансовая поддержка, полученная от TÜBİTAK, не означает, что содержание публикации одобрено TÜBİTAK в научном смысле. Авторы выражают признательность за пользование услугами и оборудованием Исследовательского центра трансляционной медицины Университета Коч (KUTTAM). Рисунки 1 и 2a были созданы с помощью Biorender.com.
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
Absolute ethanol | ISOLAB | 64-17-5 | |
Acetic acid | ISOLAB | 64-19-7 | |
Alcian blue solution | Sigma-Aldrich | B8438 | |
Deoxyribonuclease I from bovine pancreas | Sigma-Aldrich | DN25 | |
Discovery HR-2 rheometer | TA Instruments | ||
Entellan mounting medium | Merck | 107960 | |
Eosin solution | Bright-slide | 2.BS01-105-1000 | |
Formaldehyde | Electron Microscopy Sciences | 50-980-485 | |
Hydrochloric acid | Merck | 100317 | |
Iodine | Sigma-Aldrich | 3002 | |
Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | 7786-30-3 | |
Mayer's haematoxylin staining solution | Merck | 2.BS01-103-1000 | |
O.C.T compound | Tissue-Tek | 4583 | |
Penicillin/Streptomycin | Biowest | L0018-100 | |
Pepsin from porcine gastric mucosa | Sigma-Aldrich | P6887 | |
Picric acid | Polysciences | 88-89-1 | |
Sirius Red | Polysciences | 09400-25 | |
Sodium hydroxide | Sigma-Aldrich | S5881 | |
Sucrose | Sigma-Aldrich | S0389 | |
Triton-X-100 | Merck | 112298 |
Explore More Articles
This article has been published
Video Coming Soon
ABOUT JoVE
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. All rights reserved