Isolamento de Células com Informações Morfológicas e Espaciais de Amostras de Fibrose Submucosa Oral por Microdissecção por Captura a Laser

Summary

A microdissecção por captura a laser de tecidos de fibrose submucosa oral permite a extração precisa de células de regiões histológicas de interesse para a análise de dados multi-ômicos com informações morfológicas e espaciais.

Abstract

A fibrose submucosa oral (FSO) é um tipo comum de doença potencialmente maligna na cavidade oral. A atrofia do epitélio e a fibrose da lâmina própria e da submucosa são frequentemente encontradas nas lâminas histopatológicas. Displasia epitelial, atrofia epitelial e fibroblastos senescentes têm sido propostos como associados à transformação maligna da FSO. No entanto, devido à heterogeneidade de doenças orais potencialmente malignas e carcinoma epidermóide oral, é difícil identificar os mecanismos moleculares específicos de transformação maligna em FSO. Apresentamos um método para obter um pequeno número de células epiteliais ou mesenquimais carregando dados morfológicos e informações espaciais por microdissecção por captura a laser em lâminas de tecido fixadas em formalina e emblocadas em parafina. Usando um microscópio, podemos capturar precisamente em microescala (~500 células) tecido epitelial displásico ou atrófico e tecido subepitelial fibrótico. As células extraídas podem ser avaliadas por sequenciamento genômico ou transcriptoma para aquisição de dados genômicos e transcriptômicos com informações morfológicas e espaciais. Essa abordagem elimina a heterogeneidade do sequenciamento tecidual de OSF em massa e a interferência causada por células em áreas não lesionadas, permitindo uma análise espacial-ômica precisa do tecido OSF.

Introduction

A fibrose submucosa oral (FSO) é uma doença crônica e insidiosa que se desenvolve principalmente na mucosa bucal e resulta em restrição da abertura^bucal1. Enquanto a FSO é uma doença multifatorial, a mastigação da noz de areca ou noz de betel é a principal causa de FSO ^2,3. Devido a esse hábito geograficamente específico, a FSO está predominantemente concentrada em populações do Sudeste e Sul da Ásia³. As características histológicas comuns da FSO incluem deposição anormal de colágeno no tecido conjuntivo abaixo do epitélio da mucosa oral, estenose vascular e ocl....

Protocol

Este estudo foi aprovado pelo comitê de ética em pesquisa da Escola e Hospital da Universidade de Pequim. Os pacientes assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido. As amostras de tecido utilizadas neste estudo foram desidentificadas. O esquema do estudo é mostrado na Figura 1.

1. Preparação da amostra

1. Corte tecidos de fibrose oral submucosa fixados em formalina e fixados em parafina em cortes contínuos de 3 μm e 10 μm .......

Discussion

Este protocolo relatou um pipeline para capturar amostras de tecido OSF com informações morfológicas e espaciais para análises espaço-ômicas adicionais através de microdissecção a laser. A partir dos resultados representativos, identificamos diferentes padrões de CNA entre várias amostras relacionadas à morfologia.

OSF, um tipo de DMOP, é uma condição pré-cancerosa comum do carcinoma epidermóide oral6^. A instabilidade genômica tem sido relatada como as.......

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Adhesion microscope slides	CITOTEST	REF.188105
Div-haematoxylin	YiLi	20230326
Eosin solution	BASO	BA4098
Ethanol	PEKING REAGENT	No.32061
Harris hematoxylin dye solution	YiLi	20230326
Hot plate	LEICA	HI1220
Laser capture microdissection system	LEICA	LMD7	Machine
Laser microdissection microsystem	LEICA	8.2.3.7603	Software
Micromount mounting medium	LEICA	REF.3801731
Microscope cover glass	CITOTEST	REF.10212450C
Microtome	LEICA	RM2235
PCR tubes	AXYGEN	16421959
PEN-membrane slides	LEICA	No.11505158
Re-blue solution	YiLi	20230326
Ultrapure distilled water	Invitrogen	REF.10977-015
Xylene	PEKING REAGENT	No.33535