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Aqui, apresentamos um protocolo para extração de veneno de Trichogramma dendrolimi usando um hospedeiro artificial criado com filme de polietileno e solução de aminoácidos.
As vespas parasitoides são um grupo diversificado de insetos himenópteros que servem como recursos inestimáveis para o biocontrole de pragas. Para garantir o sucesso do parasitismo, as vespas parasitoides injetam veneno em seus hospedeiros para suprimir a imunidade de seus hospedeiros, modular o desenvolvimento, o metabolismo e até mesmo o comportamento dos hospedeiros. Com mais de 600.000 espécies estimadas, a diversidade de vespas parasitoides supera a de outros animais peçonhentos, como cobras, caracóis cônicos e aranhas. O veneno da vespa parasitoide é uma fonte pouco explorada de moléculas bioativas com potenciais aplicações no controle de pragas e na medicina. No entanto, a coleta de veneno de parasitoides é um desafio devido à incapacidade de usar estimulação direta ou elétrica e à dificuldade de dissecção devido ao seu pequeno tamanho. Trichogramma é um gênero de vespas parasitoides de ovos minúsculas (~0,5 mm) que são amplamente utilizadas para o controle biológico de pragas de lepidópteros na agricultura e florestas. Aqui, relatamos um método para extração de veneno de T. dendrolimi usando hospedeiros artificiais. Esses hospedeiros artificiais são criados com filme de polietileno e soluções de aminoácidos e, em seguida, inoculados com vespas Trichogramma para parasitismo. O veneno foi posteriormente coletado e concentrado. Este método permite a extração de grandes quantidades de veneno de Trichogramma , evitando a contaminação de outros tecidos causada pela dissecção, um problema comum em protocolos de dissecção de reservatórios de veneno. Esta abordagem inovadora facilita o estudo do veneno de Trichogramma , abrindo caminho para novas pesquisas e potenciais aplicações.
As vespas parasitoides são insetos himenópteros parasitas que são importantes recursos para o controle biológico1. Existe uma grande variedade de vespas parasitoides, com mais de 600.000 espécies estimadas2. A diversidade de vespas parasitoides excede em muito a de outros artrópodes peçonhentos, como cobras, caracóis cônicos, aranhas, escorpiões e abelhas. O veneno é um importante fator parasitário em vespas parasitoides. Para o sucesso do parasitismo, o veneno é injetado no hospedeiro, modulando o comportamento, a imunidade, o desenvolvimento e o metabolismo do hospedeiro3. Além disso, o veneno d....
1. Criação de insetos
A concentração proteica das amostras representativas de veneno foi medida por meio do kit de ensaio proteico, com os resultados apresentados na Tabela 1. Os resultados mostraram que a concentração de proteína do veneno coletada por esse método variou de 0,35 μg/μL a 0,46 μg/μL, enquanto o controle negativo da solução de aminoácidos apresentou apenas uma concentração proteica de 0,03 μg/μL a 0,05 μg/μL. A concentração de proteína do veneno coletada por este método é muito maior do .......
Aqui, apresentamos um método para extração de veneno de T. dendrolimi usando hospedeiros artificiais. Os pontos-chave no experimento de coleta de veneno são os seguintes. (1) Durante a preparação, T. dendrolimi deve ser anestesiado rapidamente com uma concentração adequada de CO2. Se a concentração de CO2 for muito baixa, será insuficiente para anestesiar o Trichogramma rapidamente. Por outro lado, se a concentração for muito alta, Trichogramma pode m.......
Agradecemos o apoio financeiro da Fundação de Ciências Naturais da Província de Hainan (Grant no. 323QN262), da National Natural Science Foundation of China (Grant no. 31701843 e 32172483), do Jiangsu Agriculture Science and Technology Innovation Fund (Grant No. CX(22)3012 e CX(21)3008), a Fundação "Doutor Shuangchhuang" da Província de Jiangsu (Grant No. 202030472), e o fundo de inicialização da Universidade Agrícola de Nanjing (Grant No. 804018).
....Name | Company | Catalog Number | Comments |
10 μm Nylon Net | Millipore | NY1002500 | For filtering the eggs |
10% Polyvinyl alcohol | Aladdin | P139533 | For attractting T. dendrolimi to lay eggs |
10% Sucrose water | Sinopharm Chemical Reagent | 10021463 | Feed Trichogramma dendrolimi |
4x LDS loading buffer | Ace Hardware | B23010301 | SDS-PAGE |
Collection box | Deli | 8555 | Container for T. dendrolimi parasitism |
Future PAGE 4–12% (12 wells) | Ace Hardware | J70236502X | SDS-PAGE |
GenScript eStain L1 protein staining apparatus | GenScript | L00753 | SDS-PAGE |
Glass grinding rod | Applygen | tb6268 | Semicircular protrudations |
L- Leucine | Solarbio | L0011 | Artificial host components |
L-Histidine | Aladdin | A2219458 | Artificial host components |
L-Phenylalanine | Solarbio | P0010 | Artificial host components |
Mini-Centrifuges | Scilogex | D1008 | Centrifuge |
MOPS-SDS running buffer | Ace Hardware | B23021 | SDS-PAGE |
Omni-Easy Instant BCA protein assay kit | Shanghai Yamay Biomedical Technology | ZJ102 | For esimation of venom protein concentration |
PCR plate layout of 96 holes | Thermo Fisher | AB1400L | Semicircular protrudations |
Polyethylene plastic film | Suzhou Aopang Trading | 001c5427 | Artificial egg card |
Prestained color protein marker(10–180 kDa) | YiFeiXue Biotech | YWB007 | SDS-PAGE |
Rubber band | Guangzhou qianrui biology science and technology | 009 | Tighten the plastic film and the collection box |
Silicone rubber septa mat, 96-well, round hole | Sangon Biotech | F504416-0001 | Semicircular protrudations |
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