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In This Article

  • Summary
  • Abstract
  • Introduction
  • Protocol
  • Representative Results
  • Discussion
  • Acknowledgements
  • Materials
  • References
  • Reprints and Permissions

Summary

Aqui, apresentamos um protocolo para extração de veneno de Trichogramma dendrolimi usando um hospedeiro artificial criado com filme de polietileno e solução de aminoácidos.

Abstract

As vespas parasitoides são um grupo diversificado de insetos himenópteros que servem como recursos inestimáveis para o biocontrole de pragas. Para garantir o sucesso do parasitismo, as vespas parasitoides injetam veneno em seus hospedeiros para suprimir a imunidade de seus hospedeiros, modular o desenvolvimento, o metabolismo e até mesmo o comportamento dos hospedeiros. Com mais de 600.000 espécies estimadas, a diversidade de vespas parasitoides supera a de outros animais peçonhentos, como cobras, caracóis cônicos e aranhas. O veneno da vespa parasitoide é uma fonte pouco explorada de moléculas bioativas com potenciais aplicações no controle de pragas e na medicina. No entanto, a coleta de veneno de parasitoides é um desafio devido à incapacidade de usar estimulação direta ou elétrica e à dificuldade de dissecção devido ao seu pequeno tamanho. Trichogramma é um gênero de vespas parasitoides de ovos minúsculas (~0,5 mm) que são amplamente utilizadas para o controle biológico de pragas de lepidópteros na agricultura e florestas. Aqui, relatamos um método para extração de veneno de T. dendrolimi usando hospedeiros artificiais. Esses hospedeiros artificiais são criados com filme de polietileno e soluções de aminoácidos e, em seguida, inoculados com vespas Trichogramma para parasitismo. O veneno foi posteriormente coletado e concentrado. Este método permite a extração de grandes quantidades de veneno de Trichogramma , evitando a contaminação de outros tecidos causada pela dissecção, um problema comum em protocolos de dissecção de reservatórios de veneno. Esta abordagem inovadora facilita o estudo do veneno de Trichogramma , abrindo caminho para novas pesquisas e potenciais aplicações.

Introduction

As vespas parasitoides são insetos himenópteros parasitas que são importantes recursos para o controle biológico1. Existe uma grande variedade de vespas parasitoides, com mais de 600.000 espécies estimadas2. A diversidade de vespas parasitoides excede em muito a de outros artrópodes peçonhentos, como cobras, caracóis cônicos, aranhas, escorpiões e abelhas. O veneno é um importante fator parasitário em vespas parasitoides. Para o sucesso do parasitismo, o veneno é injetado no hospedeiro, modulando o comportamento, a imunidade, o desenvolvimento e o metabolismo do hospedeiro3. Além disso, o veneno d....

Protocol

1. Criação de insetos

  1. Alimentar Corcyra cephalonica em farinha de milho à temperatura de 26 ± 1°C e umidade relativa de 40% ± 10%.
  2. Cepa T. dendrolimi do insetário Jilin em ambientes fechados utilizando ovos de Corcyra cephalonica como hospedeiros. Alimentar adultos de vespa a 10% de água de sacarose em tubos de Drosophila a uma temperatura de 26 ± 1 °C, umidade relativa de 70% ± 10%, claro (L): escuro (D) período de 14 h: 10 h.<.......

Representative Results

A concentração proteica das amostras representativas de veneno foi medida por meio do kit de ensaio proteico, com os resultados apresentados na Tabela 1. Os resultados mostraram que a concentração de proteína do veneno coletada por esse método variou de 0,35 μg/μL a 0,46 μg/μL, enquanto o controle negativo da solução de aminoácidos apresentou apenas uma concentração proteica de 0,03 μg/μL a 0,05 μg/μL. A concentração de proteína do veneno coletada por este método é muito maior do .......

Discussion

Aqui, apresentamos um método para extração de veneno de T. dendrolimi usando hospedeiros artificiais. Os pontos-chave no experimento de coleta de veneno são os seguintes. (1) Durante a preparação, T. dendrolimi deve ser anestesiado rapidamente com uma concentração adequada de CO2. Se a concentração de CO2 for muito baixa, será insuficiente para anestesiar o Trichogramma rapidamente. Por outro lado, se a concentração for muito alta, Trichogramma pode m.......

Acknowledgements

Agradecemos o apoio financeiro da Fundação de Ciências Naturais da Província de Hainan (Grant no. 323QN262), da National Natural Science Foundation of China (Grant no. 31701843 e 32172483), do Jiangsu Agriculture Science and Technology Innovation Fund (Grant No. CX(22)3012 e CX(21)3008), a Fundação "Doutor Shuangchhuang" da Província de Jiangsu (Grant No. 202030472), e o fundo de inicialização da Universidade Agrícola de Nanjing (Grant No. 804018).

....

Materials

NameCompanyCatalog NumberComments
10 μm Nylon NetMilliporeNY1002500For filtering the eggs
10% Polyvinyl alcoholAladdinP139533For attractting  T. dendrolimi  to lay eggs
10% Sucrose waterSinopharm Chemical Reagent 10021463Feed Trichogramma dendrolimi
4x LDS loading bufferAce HardwareB23010301SDS-PAGE
Collection boxDeli8555Container for T. dendrolimi parasitism
Future PAGE  4–12% (12 wells)Ace HardwareJ70236502XSDS-PAGE
GenScript eStain L1 protein staining apparatusGenScriptL00753SDS-PAGE
Glass grinding rod  Applygentb6268Semicircular protrudations 
L- LeucineSolarbioL0011Artificial host components
L-HistidineAladdinA2219458Artificial host components
L-PhenylalanineSolarbioP0010Artificial host components
Mini-CentrifugesScilogexD1008Centrifuge
MOPS-SDS running bufferAce HardwareB23021SDS-PAGE
Omni-Easy Instant BCA protein assay kitShanghai Yamay Biomedical Technology ZJ102For esimation of venom protein concentration
PCR plate layout of 96 holesThermo FisherAB1400LSemicircular protrudations 
Polyethylene plastic filmSuzhou Aopang Trading  001c5427Artificial egg card
Prestained color protein marker(10–180 kDa)YiFeiXue BiotechYWB007SDS-PAGE
Rubber bandGuangzhou qianrui biology science and technology009Tighten the plastic film and the collection box
Silicone rubber septa mat, 96-well, round holeSangon BiotechF504416-0001Semicircular protrudations 

References

  1. Pennacchio, F., Strand, M. R. Evolution of developmental strategies in parasitic hymenoptera. Annual Review of Entomology. 51, 233-258 (2006).
  2. Yan, Z. C., Ye, X. H., Wang, B. B., Fang, Q., Ye, G. Y.

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