Multiplex cyclische fluorescerende immunohistochemie

De micro-omgeving van de tumor omvat interacties tussen gastheercellen, tumorcellen, immuuncellen, stromale cellen en vasculatuur. Het karakteriseren en ruimtelijk organiseren van subsets van immuuncellen en doeleiwitten is cruciaal voor prognostische en therapeutische doeleinden. Dit heeft geleid tot de ontwikkeling van multiplexed immunohistochemie kleuringsmethoden. Multiplex-fluorescentie-immunohistochemie maakt de gelijktijdige detectie van meerdere markers mogelijk, waardoor een uitgebreid begrip van de celfunctie en intercellulaire interacties mogelijk wordt. In dit artikel beschrijven we een workflow voor de multiplex cyclische fluorescerende immunohistochemietest en de toepassing ervan in de kwantificeringsanalyse van lymfocytensubsets. De multiplex cyclische fluorescerende immunohistochemische kleuring volgt vergelijkbare stappen en reagentia als standaard immunohistochemie, waarbij antigeenextractie, cyclische antilichaamincubatie en kleuring op een in formaline gefixeerde paraffine ingebedde (FFPE) weefselglaasje betrokken zijn. Tijdens de antigeen-antilichaamreactie wordt een mengsel van antilichamen van verschillende soorten bereid. Omstandigheden, zoals de ophaaltijd van het antigeen en de concentratie van antilichamen, worden geoptimaliseerd en gevalideerd om de signaal-ruisverhouding te verhogen. Deze techniek is reproduceerbaar en dient als een waardevol hulpmiddel voor onderzoek naar immunotherapie en klinische toepassingen.